服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
石蠟切片(FFPE)核酸提取試劑盒 | 32次/盒 、50次/盒 | YS-P013212 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
丙型肝炎(HCV) 預(yù)分裝磁珠法 丙型肝炎(HCV)核酸提取試劑盒(MB32)
預(yù)分裝磁珠法 丙型肝炎(HCV)核酸提取試劑盒(MB96)
預(yù)分裝磁珠法 丙型肝炎(HCV)核酸提取試劑盒(MB48)
磁珠法 丙型肝炎(HCV)核酸提取試劑盒
離心柱法 丙型肝炎(HCV)核酸提取試劑盒
地中海貧血基因 預(yù)分裝磁珠法 地中海貧血基因提取試劑盒(MB32)
預(yù)分裝磁珠法 地中海貧血基因提取試劑盒(MB96)
預(yù)分裝磁珠法 地中海貧血基因提取試劑盒(MB48)
磁珠法 地中海貧血基因提取試劑盒
離心柱法 地中海貧血基因提取試劑盒
結(jié)核分歧桿菌 預(yù)分裝磁珠法 結(jié)核分歧桿菌核酸提取試劑盒(MB32)
預(yù)分裝磁珠法 結(jié)核分歧桿菌核酸提取試劑盒(MB96)
預(yù)分裝磁珠法 結(jié)核分歧桿菌核酸提取試劑盒(MB48)
磁珠法 結(jié)核分歧桿菌核酸提取試劑盒
離心柱法 結(jié)核分歧桿菌核酸提取試劑盒
通用型 預(yù)分裝磁珠法 通用型基因組DNA提取試劑盒(MB32)
預(yù)分裝磁珠法 通用型基因組DNA提取試劑盒(MB96)
預(yù)分裝磁珠法 通用型基因組DNA提取試劑盒(MB48)
磁珠法 通用型基因組DNA提取試劑盒
離心柱法 通用型基因組DNA提取試劑盒
病毒 預(yù)分裝磁珠法 病毒DNA/RNA提取試劑盒(MB32)
預(yù)分裝磁珠法 病毒DNA/RNA提取試劑盒(MB96)
預(yù)分裝磁珠法 病毒DNA/RNA提取試劑盒(MB48)
磁珠法 病毒DNA/RNA提取試劑盒
離心柱法 病毒DNA/RNA提取試劑盒
phospho-ATG7(Ser95) 磷酸化自噬相關(guān)蛋白7抗體
phospho-ATG16A(Ser287) 磷酸化自噬相關(guān)蛋白16A抗體
phospho-ATG9A(Ser735) 磷酸化自噬相關(guān)蛋白9A抗體
phospho-ATG4D(Ser341) 磷酸化自噬相關(guān)蛋白4D抗體
phospho-ATG4D(Ser467) 磷酸化自噬相關(guān)蛋白4D抗體
phospho-TEM8 (Tyr382) 磷酸化血管內(nèi)皮標(biāo)志物8抗體
phospho-ATG4A(Ser100) 磷酸化自噬相關(guān)蛋白4A抗體
phospho-ATG4C(Ser166) 磷酸化自噬相關(guān)蛋白4C抗體
phospho-ATG16A(Ser213) 磷酸化自噬相關(guān)蛋白16A抗體
phospho-AKT3 (Ser472) 磷酸化蛋白激酶AKT3抗體
phospho-ADRB2 (Ser261) 磷酸化腎上腺素能受體β2抗體
phospho-AQP2(Ser261) 磷酸化水通道蛋白2抗體
phospho-ATG3 (Tyr18) 磷酸化自噬相關(guān)蛋白3抗體
ALDOB 醛縮酶2抗體
AMY2A 胰腺α淀粉酶抗體
ANKRD11 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白11抗體
phospho-c-ABL1+2 (Tyr393+429) 磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體
phospho-ATF2 (Thr53) 磷酸化活化復(fù)制因子2抗體
AKR1D1 醛固酮還原酶家族1成員D1抗體
ARP4 肝血管生成素相關(guān)蛋白抗體
ABHD5 自水解酶結(jié)構(gòu)域5蛋白抗體
ACOT8 ?;o酶A硫酯酶8
Agpat2 溶血磷脂酸?;D(zhuǎn)移酶β抗體
AFP4b AFP4b蛋白抗體
APOC2 載脂蛋白C2抗體
Apolipoprotein A V 載脂蛋白A5抗體
APOA2 載脂蛋白A2抗體
AGPAT4 溶血磷脂酸?;D(zhuǎn)移酶D抗體
石蠟切片(FFPE)核酸提取試劑盒APOE3 載脂蛋白E3抗體
ABI3 ABI基因家族2抗體
AARE 氧化蛋白質(zhì)水解酶
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。