一、樣品提取
稱取5.0 g樣品于50 mL離心管中，加入濃度為1 μg/mL同位素內(nèi)標(biāo)-13C5溶液10 μL，加入12 mL 20 g/L三水溶液和2.5 mL乙腈，渦旋混勻30 s，超聲10 min，于8000 r/min離心5 min，上清液全部轉(zhuǎn)移至50 mL離心管中，再向樣品中加入10 mL 20 g/L三水溶液重復(fù)提取一次，合并兩次提取液，用三水溶液定容至25 mL，再準(zhǔn)確移取5 mL，用氨水調(diào)節(jié)pH至8.5（±0.1）待凈化（本實(shí)驗(yàn)是采用陰性樣本做基質(zhì)加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，故省略酶解步驟）。
二、SPE凈化（GL PBA, 100 mg/3 mL）
（1）活化：向PBA柱中依次加入3 mL乙腈，3 mL 0.25 mol/L乙酸銨緩沖液（pH=8.5）進(jìn)行活化。
（2）上樣和洗脫：取上述待凈化液過(guò)柱，控制流速不超過(guò)1 s/滴，然后用3 mL 0.25 mol/L乙酸銨緩沖液（pH=8.5）淋洗小柱，棄去全部流出液，抽干小柱，用2 mL 0.1 mol/L甲酸水溶液洗脫，抽干小柱，收集全部洗脫液。
（3）上機(jī)：取上述洗脫液過(guò)0.22 μm PES水系濾膜，供上機(jī)分析。
三、標(biāo)曲配制
采用內(nèi)標(biāo)法定量，分別精密量取適量的標(biāo)準(zhǔn)溶液和同位素內(nèi)標(biāo)-13C5工作液，用0.1 mol/L甲酸水溶液配制成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
四、儀器條件
色譜條件
儀器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TQS Endura）
色譜柱： HILIC，2.1 mm×100 mm，3 μm
流動(dòng)相：A：5 mmol/L乙酸銨溶液（含0.1%甲酸） B：乙腈
洗脫方式：梯度洗脫，見表1
表1 梯度洗脫程序
流速：0.4 mL/min
柱溫：30 ℃
進(jìn)樣量：2 μL
質(zhì)譜條件
離子源：HESI 電噴霧電壓：3500V
鞘氣壓力：40 arb 輔氣壓力：1 arb
離子傳輸管：300 ℃ 輔氣溫度：400 ℃
表2 組分名稱、保留時(shí)間及特征離子一覽表（*為定量離子）
五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
表3 添加水平為2.0 μg/kg動(dòng)物源性食品中加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果
產(chǎn)品列表
稱取5.0 g樣品于50 mL離心管中，加入濃度為1 μg/mL同位素內(nèi)標(biāo)-13C5溶液10 μL，加入12 mL 20 g/L三水溶液和2.5 mL乙腈，渦旋混勻30 s，超聲10 min，于8000 r/min離心5 min，上清液全部轉(zhuǎn)移至50 mL離心管中，再向樣品中加入10 mL 20 g/L三水溶液重復(fù)提取一次，合并兩次提取液，用三水溶液定容至25 mL，再準(zhǔn)確移取5 mL，用氨水調(diào)節(jié)pH至8.5（±0.1）待凈化（本實(shí)驗(yàn)是采用陰性樣本做基質(zhì)加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，故省略酶解步驟）。
二、SPE凈化（GL PBA, 100 mg/3 mL）
（1）活化：向PBA柱中依次加入3 mL乙腈，3 mL 0.25 mol/L乙酸銨緩沖液（pH=8.5）進(jìn)行活化。
（2）上樣和洗脫：取上述待凈化液過(guò)柱，控制流速不超過(guò)1 s/滴，然后用3 mL 0.25 mol/L乙酸銨緩沖液（pH=8.5）淋洗小柱，棄去全部流出液，抽干小柱，用2 mL 0.1 mol/L甲酸水溶液洗脫，抽干小柱，收集全部洗脫液。
（3）上機(jī)：取上述洗脫液過(guò)0.22 μm PES水系濾膜，供上機(jī)分析。
三、標(biāo)曲配制
采用內(nèi)標(biāo)法定量，分別精密量取適量的標(biāo)準(zhǔn)溶液和同位素內(nèi)標(biāo)-13C5工作液，用0.1 mol/L甲酸水溶液配制成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
四、儀器條件
色譜條件
儀器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TQS Endura）
色譜柱： HILIC，2.1 mm×100 mm，3 μm
流動(dòng)相：A：5 mmol/L乙酸銨溶液（含0.1%甲酸） B：乙腈
洗脫方式：梯度洗脫，見表1
表1 梯度洗脫程序
流速：0.4 mL/min
柱溫：30 ℃
進(jìn)樣量：2 μL
質(zhì)譜條件
離子源：HESI 電噴霧電壓：3500V
鞘氣壓力：40 arb 輔氣壓力：1 arb
離子傳輸管：300 ℃ 輔氣溫度：400 ℃
表2 組分名稱、保留時(shí)間及特征離子一覽表（*為定量離子）
五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
表3 添加水平為2.0 μg/kg動(dòng)物源性食品中加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果
產(chǎn)品列表
