在動物源樣品中獸藥殘留的液質(zhì)檢測中，樣品中的脂類物質(zhì)會干擾待測物檢測。脂類物質(zhì)往往會對液質(zhì)檢測形成基質(zhì)增強(qiáng)或抑制效應(yīng)，導(dǎo)致化合物的測試回收率與實(shí)際回收率相差很大，影響回收率的計算，導(dǎo)致測試數(shù)據(jù)與實(shí)際結(jié)果存在較大偏差。
Cleanert LipoNo是博納艾杰爾科技有限公司新研發(fā)的一種除脂材料，填料表面修飾了許多長的碳鏈，可針對性地吸附脂肪。它以QuEChERS 的方式對脂類含量較高的樣品如肉、蛋、奶等進(jìn)行前處理，能在除脂的同時，保證獸藥的良好回收率，方法操作簡單便捷，適于處理大量樣品。
Cleanert LipoNo為大顆粒材料，無需離心，靜置即可分層，操作進(jìn)一步簡化。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
Cleanert LipoNo | 15mL離心管，50支/包 | LN0415 |
Cleanert LipoNo對甘油一酯、甘油二酯和甘油三酯均有很好的吸附效果，比其他填料具有更好地去除脂類物質(zhì)的性能。
圖1. 通過觀察4種不同填料Cleanert LipoNo、C18+PSA（質(zhì)量比1/1）、 氧化鋯和疏水體積排阻材料，重量均為1g，分別對甘油一酯、甘油二酯、甘油三酯的去除效果，來評判各填料的除油性能。Cleanert LipoNo 的綜合除脂效果優(yōu)于其余三種填料。
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考察Cleanert LipoNo和其他三種材料對雞肉組織基質(zhì)的去除效果，對凈化前后最終萃取物進(jìn)行GC/MS 全掃描，并對全掃描色譜圖進(jìn)行積分，根據(jù)公式計算得出了樣品基質(zhì)去除率，結(jié)果表明四種材料中，Cleanert LipoNo能夠更有效地去除雞肉樣品中基質(zhì)干擾。
圖2. 雞肉組織經(jīng)過三種材料凈化后，GC-MS全掃法測定雞肉樣品基質(zhì)去除效率（%）結(jié)果。結(jié)果表明Cleanert LipoNo能夠更有效地去除雞肉樣品中基質(zhì)干擾。
雞肉樣品后添加實(shí)驗(yàn)，排除了提取效率和材料本身對獸藥的吸附等影響。直觀的可以看到通過去除樣品基質(zhì)效應(yīng)帶來的對回收率的改善。
采用Cleanert LipoNo、C18+PSA（質(zhì)量比1/1）、 氧化鋯材料和疏水體積排阻材料四種材料，對雞肉樣品用同樣的前處理方式做樣品處理后，添加13種磺胺類獸藥（加標(biāo)濃度20ppb），與無樣品基質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)品對比，得到13種磺胺類藥物的回收率結(jié)果。結(jié)果顯示，Cleanert LipoNo能夠更有效地減小基質(zhì)效應(yīng)，并且數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性更好。
圖3. 磺胺類藥物基質(zhì)效應(yīng)結(jié)果，雞肉組織經(jīng)過Cleanert lipoNo凈化過的樣品基質(zhì)效應(yīng)的影響低于C18+PSA（質(zhì)量比1/1）、 氧化鋯材料和疏水體積排阻材料處理的樣品
圖4. 磺胺類藥物回收率RSD結(jié)果，雞肉組織經(jīng)過Cleanert lipoNo凈化過的樣品數(shù)據(jù)穩(wěn)定性優(yōu)于C18+PSA（質(zhì)量比1/1）、 氧化鋯材料和疏水體積排阻材料處理的樣品。
表1. 磺胺類藥物回收率及RSD結(jié)果（n=6）
藥物名稱 | 平均回收率（n=6） | RSD (n=6) | ||||||
Cleanert LipoNo | C18+PSA | 氧化鋯材料 | 疏水性體積排阻材料 | Cleanert LipoNo | C18+PSA | 氧化鋯材料 | 疏水性體積排阻材料 | |
Sulfamerazine | 101% | 88% | 98% | 87% | 6% | 15% | 10% | 16% |
Sulfamethazine | 96% | 36% | 43% | 96% | 5% | 17% | 9% | 5% |
Sulfamonomethoxine | 96% | 54% | 64% | 97% | 2% | 20% | 5% | 17% |
Sulfamethizole | 103% | 48% | 56% | 97% | 3% | 8% | 7% | 6% |
Sulfameter | 68% | 102% | 103% | 75% | 3% | 4% | 9% | 20% |
Sulfadimethoxine | 97% | 104% | 106% | 95% | 2% | 2% | 2% | 5% |
Sulfamethoxazole | 109% | 84% | 90% | 97% | 4% | 4% | 4% | 5% |
Sulfisoxazole | 98% | 102% | 106% | 83% | 7% | 2% | 4% | 4% |
Sulfabenzamide | 89% | 103% | 107% | 89% | 3% | 2% | 4% | 5% |
Sulfaquinoxaline | 82% | 96% | 99% | 82% | 4% | 1% | 5% | 6% |
Sulphacetamide | 66% | 69% | 71% | 62% | 3% | 1% | 7% | 19% |
Trimethoprim | 84% | 105% | 110% | 81% | 4% | 6% | 8% | 12% |
Sulfaphenazole | 95% | 95% | 98% | 86% | 3% | 2% | 5% | 7% |
雞肉中106種獸藥殘留的分析方法
本實(shí)驗(yàn)選擇常用的106種獸藥，分14個大類。種獸殘，其中雄激素類有1種，磺酰脲類有3種，糖皮質(zhì)激素類有32種，非甾體類有11種，磺胺類有18種，硝基咪唑類有14種，喹諾酮類有13種，大環(huán)內(nèi)酯類有4種，四環(huán)素類有4種，頭孢類1種，類有3種，金剛烷胺，吡啶類有1種。
樣品經(jīng)0.1 mol/L EDTA水溶液和乙腈提取，Cleanert LipoNo凈化，LC-MS/MS檢測，Venusil MP C18進(jìn)行分離，外標(biāo)法進(jìn)行定量。結(jié)果表明，106種獸藥的回收率在60% ~ 120%之間，RSD小于20%，能夠滿足檢測要求。
圖5. 雞肉中106種獸藥殘留的分析方法回收率和RSD結(jié)果，添加水平0.01mg/kg或0.02mg/kg，106種獸藥的回收率在60% ~ 120%之間，RSD小于20%，能夠滿足檢測要求。
表2. 雞肉中106種獸殘加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=3)
藥物分類 | 數(shù)量 | 添加水平/mg/kg | 平均回收率% | 平均RSD% |
雄激素類 | 1 | 0.01 | 64.6 | 18.0 |
磺酰脲類 | 3 | 0.01 | 89.4 | 10.7 |
糖皮質(zhì)激素類 | 32 | 0.01 | 87.2 | 9.3 |
非甾體類 | 11 | 0.01 | 102.6 | 7.2 |
磺胺類 | 18 | 0.02 | 78.3 | 4.5 |
硝基咪唑類 | 14 | 0.01 | 98.1 | 7.4 |
喹諾酮類 | 13 | 0.02 | 72.3 | 6.7 |
大環(huán)內(nèi)酯類 | 4 | 0.02 | 78.0 | 6.6 |
四環(huán)素類 | 4 | 0.01 | 85.1 | 10.7 |
頭孢類 | 1 | 0.02 | 71.1 | 2.2 |
類 | 3 | 0.01 | 103.9 | 13.9 |
金剛烷胺 | 1 | 0.01 | 78.0 | 12.3 |
吡啶類 | 1 | 0.01 | 74.7 | 19.5 |
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動物源性食品中9種β-受體激動劑快速檢測方法
β-受體激動劑檢測常用的提取凈化方法為液-液萃取和固相萃取方法，操作較為煩瑣，比較耗費(fèi)時間，本實(shí)驗(yàn)采用Cleanert LipoNo凈化除脂，建立了豬臀肉、牛后腿肉與羊腿肉三種基質(zhì)中9種β-受體激動劑快速檢測方法。型β-受體激動劑在生物機(jī)體內(nèi)的代謝以軛合態(tài)存在，其殘留檢測必須經(jīng)過水解過程，實(shí)驗(yàn)中，樣品經(jīng)過均質(zhì)和酶解后，氨化乙腈提取，Cleanert LipoNo凈化，LC-MS/MS檢測，Kinetex® F5進(jìn)行分離，外標(biāo)法進(jìn)行定量。結(jié)果表明，豬臀肉、牛后腿肉與羊腿肉酶解后加標(biāo)回收率均大于70%，RSD小于20%，滿足實(shí)驗(yàn)要求。
圖5. 9種β-受體激動劑快速檢測方法回收率和RSD結(jié)果。添加水平5μg/Kg ，豬臀肉、牛后腿肉與羊腿肉酶解后加標(biāo)回收率均大于70%，RSD小于20%，能夠滿足檢測要求。
表3. 肌肉組織中9種受體激動機(jī)加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果（加標(biāo)濃度：5μg/Kg ）
豬臀肉 | 牛腿肉 | 羊腿肉 | ||||
平均回收率，% | RSD，% | 平均回收率，% | RSD，% | 平均回收率，% | RSD，% | |
Ractopamine 萊克多巴胺 | 93.8 | 13.9 | 80.0 | 8.1 | 85.3 | 3.2 |
Salbutamol | 85.1 | 0.1 | 74.7 | 8.5 | 74.6 | 0.4 |
Terbutaline 特布他林 | 81.8 | 2.4 | 75.5 | 4.8 | 78.0 | 4.7 |
Cimaterol 西馬特羅 | 91.9 | 8.0 | 85.3 | 3.9 | 88.9 | 3.7 |
Clenbuterol 克倫特羅 | 85.0 | 12.1 | 89.6 | 4.6 | 80.0 | 2.4 |
Tulobuterol 妥洛特羅 | 82.8 | 14.9 | 86.8 | 2.4 | 89.7 | 0.6 |
penbutolol 噴布特羅 | 84.6 | 3.2 | 81.1 | 0.9 | 84.9 | 1.0 |
propanolol 心得安 | 85.6 | 10.7 | 85.9 | 3.9 | 81.7 | 2.2 |
clorprenaline 氯丙那林 | 90.6 | 13.8 | 96.9 | 4.6 | 89.2 | 7.1 |
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