產(chǎn)品說(shuō)明
SCIENTZ-2C基因?qū)雰x由儀器主機(jī)、基因?qū)氡斑B接線等組成。主要是利用電轉(zhuǎn)化來(lái)將DNA轉(zhuǎn)入受態(tài)細(xì)菌、動(dòng)植物細(xì)胞、酵母細(xì)胞中。與其它方法相比，基因?qū)雰x法具有高重復(fù)性，高效率、操作簡(jiǎn)易、可定量控制等優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)，電轉(zhuǎn)沒有基因毒性，已經(jīng)成為的分子生物學(xué)基本技術(shù)。
工作原理
細(xì)胞電轉(zhuǎn)染（電轉(zhuǎn)），也叫細(xì)胞電穿孔 (electroporation)，是把外源大分子物質(zhì)DNA、RNA、siRNA、蛋白質(zhì)等以及一些小分子導(dǎo)入細(xì)胞膜內(nèi)部的重要方法。
在瞬間強(qiáng)大電場(chǎng)的作用下，溶液中細(xì)胞的細(xì)胞膜具有了一定的通透性，帶電的外源物質(zhì)以類似電泳的方式進(jìn)入細(xì)胞膜。由于細(xì)胞膜磷脂雙分子層的電阻很大，細(xì)胞外部電流場(chǎng)產(chǎn)生的細(xì)胞兩極電壓都被細(xì)胞膜承受，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)分到的電壓可以忽略不計(jì)，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)部幾乎沒有電流，因此也決定了正常范圍內(nèi)的電轉(zhuǎn)過(guò)程中細(xì)胞毒性很小。電場(chǎng)使DNA等物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞膜后只能停止在細(xì)胞膜附近，隨后細(xì)胞本身的機(jī)制可以允許這些物質(zhì)到細(xì)胞核等處。
由于電轉(zhuǎn)技術(shù)依靠的是物理方法，細(xì)胞表面的分子特性對(duì)電轉(zhuǎn)影響比較小。相比化學(xué)轉(zhuǎn)染方法和病毒載體轉(zhuǎn)染方法，電轉(zhuǎn)可以用在所有的細(xì)胞種類上，而且容易定量控制。
細(xì)胞電轉(zhuǎn)電場(chǎng)圖 1 細(xì)胞膜近似絕緣體，細(xì)胞附近電轉(zhuǎn)液中電流扭曲。 2 在串聯(lián)電路中電阻越大分到電壓越大，細(xì)胞兩端電壓基本都落在兩端細(xì)胞膜上。 3 只有一個(gè)細(xì)胞端面電轉(zhuǎn)有效。 4 細(xì)胞質(zhì)內(nèi)分到電壓很小，DNA電轉(zhuǎn)進(jìn)入細(xì)胞膜后馬上停止，后續(xù)靠細(xì)胞本身機(jī)制慢速擴(kuò)散。 5 細(xì)胞核兩端電壓及其微小，微小的電壓又落在核膜上，核內(nèi)部沒有電壓，電轉(zhuǎn)沒有基因毒性。 |
|
應(yīng)用領(lǐng)域
|
|
|
|
? 細(xì)菌、酵母及其他微生物的電轉(zhuǎn)化 | ? 導(dǎo)入藥物、蛋白、抗體等分子對(duì)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行研究 | ? 細(xì)胞雜交、融合基因?qū)?/span> |
? 導(dǎo)入標(biāo)記基因起到標(biāo)記、指示的作用 | ? 哺乳動(dòng)物細(xì)胞的轉(zhuǎn)染、植物組織和原生質(zhì)體質(zhì)體的轉(zhuǎn)染 |
產(chǎn)品特點(diǎn)
? 轉(zhuǎn)化率高 轉(zhuǎn)化時(shí)間短、重復(fù)性優(yōu)異 | ? 智能儲(chǔ)存 可存儲(chǔ)實(shí)驗(yàn)日志，并且自定義程序無(wú)存儲(chǔ) |
? 控制精準(zhǔn) 采用微處理器控制的脈沖放電 | ? 外形美觀 整機(jī)一體化設(shè)計(jì)，顯示直觀，操作簡(jiǎn)單 |
實(shí)驗(yàn)介紹
1、LI J等人基于高通量篩選分析p53–MDM2蛋白相互作用的小分子抑制劑的研究結(jié)果。 | 2、ZHANG S Y等人發(fā)現(xiàn)和鑒定一個(gè)的G蛋白偶聯(lián)受體119激動(dòng)劑的研究結(jié)果 | |
|
|
1、LI J, ZHANG S, GAO L, et al. A cell-based high-throughput assay for the screening of small-molecule inhibitors of p53-MDM2 interaction [J]. Journal of biomolecular screening, 2011.
2、ZHANG S Y, LI J, XIE X. Discovery and characterization of novel small molecule agonists of G protein-coupled receptor 119 [J]. Acta pharmacologica Sinica, 2014.
不同菌種的轉(zhuǎn)化率
| 品種 | 品種 | 電容 | 電阻 | 導(dǎo)入盒 | 轉(zhuǎn)化率 | 反饋用戶名 |
| 酵母 | 1200-1500V | 25µF | 200-400Ω | 2mm | 2.2-3.2*102cfu/ug DNA | 上海肺科醫(yī)院 |
| 大腸桿菌 | 1250V | 5µF | 400-1000Ω | 1mm | 10 -10 cfu/ug DNA | 清華大學(xué) |
| 大腸桿菌 | 1100V | 5µF | 500Ω | 1mm | 2500cfu/ug DNA | 清華大學(xué) |
| 大腸桿菌 | 1500V | 25µF | 400Ω | 2mm | 2500cfu/ug DNA左右 | 總醫(yī)院 |
| 羊細(xì)胞 | 250V | 500µF | 500Ω | 4mm | 102cfu/ug DNA | 中科院發(fā)育所 |
| 畢赤酵母 | 1500V | 25µF | 400Ω | 2mm | 1.8x103cfu/ug DNA | 華東師范大學(xué) |
| 枯草芽孢桿菌 | 1250V | 25µF | 400Ω | 2mm | 102cfu/ug DNA | 華東師范大學(xué) |
備注：因各單位實(shí)驗(yàn)條件不盡相同，以上實(shí)驗(yàn)參數(shù)僅供參考
