Zenix-C SEC柱使用說明
色譜柱信息:
Zenix-C SEC鍵合固定相是采用的表面修飾技術(shù)和3 μm的粒徑，通過在高純度具有良好機械穩(wěn)定性的硅膠基質(zhì)上鍵合均勻的納米厚度的親水涂層而制備得到。的化學修飾技術(shù)可******控制親水涂層的厚度，從而確保柱與柱之間有著******的重現(xiàn)性。由于采用化學鍵合技術(shù)，且涂層覆蓋******，因此Zenix-C SEC柱具有******的穩(wěn)定性。均勻的表面涂層******了分離的高效性。SEC-100、SEC-150和SEC-300填料為窄粒徑分布的球形顆粒，孔徑分別為100?、150?和300?。3 μm的小粒徑和精心設(shè)計的大孔體積（Zenix-C SEC-150和300孔體積約為1.35 mL/g，Zenix-C SEC-100孔體積約為1.0 mL/g）使得Zenix 柱具有************的高分離效率和分辨率。Zenix-C SEC柱通過運用的勻漿裝填技術(shù)裝填得到的柱床密度均一穩(wěn)定，獲得很大的柱效。 Zenix-C SEC柱為各種分離應(yīng)用提供優(yōu)良分辨率和很高回收率。應(yīng)用領(lǐng)域覆蓋了大分子量的生物分子（如蛋白質(zhì)、核酸）、小分子量的生物分子（如多肽、寡核苷酸）、天然聚合物（如多糖）、合成聚合物、生物細胞（如細菌和病毒）、納米材料（如納米顆粒）等。Zenix-C SEC柱一般在緩沖溶液中進行樣品的分離和檢測。
穩(wěn)定性和性能
Zenix-C SEC柱使用的是被******覆蓋的鍵合硅膠填料，因此具有******的穩(wěn)定性。它與大多數(shù)緩沖液相容，如醋酸銨、磷酸鹽、Tris等。在pH 7.0，流動相為150 mM 磷酸鹽緩沖液環(huán)境下，對Zenix-C SEC柱進樣300次或使用1個月，其分離性能幾乎沒有發(fā)生改變。
Zenix-C SEC固定相具有中性、親水的特點，與生物分子特別是蛋白質(zhì)之間的非特異性相互作用非常小。Zenix-C SEC柱還具有高容量的特點，因此能******高的分離效率和回收率。圖1是7.8 x 300 mm Zenix-C SEC柱的質(zhì)量控制色譜圖。
圖1. 蛋白混合物在Zenix-C SEC-100、Zenix-C SEC-150和Zenix-C SEC-300柱上的分離色譜圖
色譜柱: 3 μm, 7.8x300 mm流動相: 150 mM Sodium Phosphate Buffer, pH 7流速: 1.0 mL/min檢測器: UV 214nm進樣量: 10 μL樣品: 1) 甲狀腺球蛋白, 670 kD; 2) γ-球蛋白, 158 kD; 3) 卵清蛋白, 44 kD; 4) 肌球蛋白, 16.9 kD; 5) 12, 1355D.
色譜柱特征參數(shù)
硅膠：球形、高純度（金屬含量<10ppm）
粒徑：3 μm
孔徑：
100?, 適用蛋白分子量范圍100 ~ 100,000
150?, 適用蛋白分子量范圍500 ~ 150,000
300?, 適用蛋白分子量范圍5,000 ~1,250,000
安全注意事項
Zenix-C SEC柱通常在中壓下運行。如果管路連接不緊，將會導致有機溶劑和注入樣品的泄漏，從而對操作人員的健康產(chǎn)生影響。一旦發(fā)生泄漏，應(yīng)佩戴適當?shù)氖痔走M行處理。另外當打開色譜柱時還應(yīng)采取適當?shù)谋Ｗo措施，以防止微小的硅膠顆粒進入呼吸道。
色譜柱安裝與操作
色譜柱在運輸過程中或在沒有使用時，它的兩端總是用堵頭進行密封。當將色譜柱接入色譜儀器系統(tǒng)時，首先移去兩端的堵頭。請注意將流動相流動的方向與柱上標記的方向保持一致。除非出于特殊考慮，例如為了清除堵在色譜柱入口端的臟污等而需要將色譜柱反接以進行沖洗時，建議用戶在接上色譜柱時一定要遵循柱上標記的方向。由于色譜柱的連接是整個色譜操作過程的一部分，如果密封卡套過緊，或安裝不合適，或者密封卡套與色譜柱端口不匹配，都有可能導致溶液的泄漏。請按照下面步驟將色譜柱與密封卡套相連接，從而將色譜柱接入HPLC系統(tǒng)：
（a）******使用的管線，請依次將管線接頭和密封卡套裝在外徑1/16”的管線上。密封卡套的寬口端應(yīng)朝向管線接頭。
（b）將管線緊緊插入色譜柱的接口，向前滑動密封卡套和管線接頭，并使管線接頭的螺紋與色譜柱端口的螺紋相互銜接，然后擰緊管線接頭。如果管線為高分子材料，請轉(zhuǎn)到步驟（d）；如果是金屬管線，請繼續(xù)（c）。
（c）在用力將管線壓入柱端接口之后，用1/4”扳手將已擰緊的螺帽再進一步緊固。
（d）對色譜柱的另一端采用上述方法進行操作。樣品與流動相
為了避免色譜柱的堵塞，所有樣品和溶劑，包括緩沖溶液在內(nèi)，都必須在使用前用0.45 μm或0.2 μm的濾膜過濾。Zenix-C SEC柱可以使用水或有機溶劑和水的混合物，如甲醇（或乙腈）的水溶液等作為流動相。流動相在使用前需要脫氣。一個簡單的脫氣方法是將流動相在由水泵形成的真空下超聲5 min。
色譜柱的保養(yǎng)
運輸溶劑 新柱中的液相是150 mM磷酸鈉緩沖液（pH 7.0）。在儲存和運輸過程中，硅膠填料可能會干涸。這時推薦用10-20倍柱體積的50 mM磷酸鈉緩沖液（pH 7.0）進行沖洗以活化色譜柱。接著可用用戶自己選擇的流動相沖洗色譜柱，流速由0.1 mL/min逐漸升至所需的操作條件，直至基線穩(wěn)定為止。如果柱壓和基線波動較大，這可能是氣泡進入了色譜柱中。這時可用較高流速沖洗色譜柱2-5分鐘，例如對于4.6 x 300 mm和7.8 x 300 mm的色譜柱可采用流速分別是0.5 mL/min和1.25 mL/min。 為了獲得很好的分離效果和延長柱的使用壽命，請盡量使用pH在2-8.5范圍內(nèi)的流動相。
壓力 盡管色譜柱可在高至3500 psi的壓力下使用，但正常的操作壓力應(yīng)當?shù)陀?000 psi。長時間在高壓下運行會損壞色譜柱。由于壓力來源于流速，因此流速將受制于系統(tǒng)所能承受的壓力。一般而言，柱壓會隨著色譜柱使用時間的增加而逐漸增加。壓力突然增加預示色譜柱入口端的篩板發(fā)生了堵塞。在這種情況下，建議將色譜柱反接后用適宜的溶劑進行沖洗。
溫度 操作溫度為80oC。為了獲得很長的使用時間，操作溫度為10-30oC。長時間在高溫（>80oC）下操作也會損壞色譜柱，這種情形在高的pH（>8）條件下特別突出。
流速范圍 內(nèi)徑為4.6 mm和7.8 mm的色譜柱，其正常操作流速分別為0.1-0.4和0.1-1.25 mL/min。
儲藏 長期不用時，需要將色譜柱貯存在150 mM磷酸鈉緩沖液（pH 7.0）。中。每根色譜柱在運輸過程中均會附有兩個可拆卸的堵頭。為了防止柱床干涸，請用堵頭塞緊色譜柱的兩端。
清洗 多次使用后某些樣品可能會吸附到入口篩板或填料上。當積累至一定程度時會出現(xiàn)壓力升高并伴隨峰形展寬的現(xiàn)象。出現(xiàn)這種情況需要清洗色譜柱，一般清洗流程如下：
1. 將色譜柱與檢測器斷開；
2. 將色譜柱反接后進行沖洗；
3. 在低于50%推薦流速的條件下沖洗色譜柱。注意柱壓的變化。如果柱壓超出正常水平許多，可降低流速或更換低粘度的緩沖液作為沖洗溶劑；
4. 一般用清洗溶液沖洗10-15倍柱體積即可。更換溶液時請用3-5倍柱體積的經(jīng)過蒸餾的去離子水將色譜柱沖洗干凈。
清洗溶液 低pH的鹽溶液有助于移除堿性蛋白。有機溶劑有助于移除疏水蛋白。助溶劑有助于去除在固定相上強吸附的物質(zhì)（如通過氫鍵作用等）。應(yīng)注意只有在中性鹽溶液或有機溶劑沒有明顯改善效果的情況下使用助溶劑。這里推薦兩種常用的清洗溶液：
1. 具有低pH值的高濃度中性鹽溶液（如0.5 M 硫酸鈉溶液，pH 3.0）。
2. 含有機溶劑（如10-20%的甲醇、乙腈、乙醇等）的緩沖溶液（如50 mM磷酸鹽緩沖液，pH 7.0）。
色譜柱的保護
除了需要過濾樣品和流動相外，保護色譜柱的方法是在色譜柱前連接保護柱或預柱濾片。預柱濾片可以去除樣品或流動相中的殘留顆粒，或者從HPLC系統(tǒng)，如泵或進樣器墊圈上脫離下來的顆粒。更為有效的方法是使用保護柱，因為它可以除去樣品、流動相或者來自于HPLC系統(tǒng)中的具有強吸附能力的樣品組分和殘留顆粒。
