顯微鏡專家們都知道,要想從三維顯微結(jié)構(gòu)中獲取一組清晰的Z軸光切圖像,是一項困難的挑戰(zhàn)。Media Cybernetics推出的AutoQuant三維反卷積軟件,可以從一組模糊的光切圖像中提取出清晰的序列圖像。該軟件使用非鄰(No Neighbor)、zui近相鄰(Nearest Neighbor)、反轉(zhuǎn)濾波器(Inverse Filter)、二維/三維盲算法(2D/3D Blind)、二維/三維非盲算法(2D/3D Non-Blind)等反卷積算法,可同時清晰化系列光切圖像中的單張或所有圖像。
與共聚焦顯微鏡所采用的方法不同,數(shù)字反卷積技術(shù)不使用共焦針孔,因此能將所有物鏡搜集到的熒光信號全部送到高靈敏度的相機中形成圖像。它利用圖像系統(tǒng)的點擴散函數(shù)(point spread function, PSF),通過反卷積運算可將來自于非聚焦面雜散光的影響從焦面圖像中扣除。如果將顯微鏡的光學系統(tǒng)定義為一個線性和無偏移的數(shù)學模型,那么點擴散函數(shù)就可以用來描述顯微鏡的成像機理。一個典型的熒光顯微鏡圖像可表達為:
[測量到的圖像] = [PSF] * [理想圖像]
這里 ”*” 代表數(shù)學的卷積操作,那么反卷積操作可表示為:
[理想圖像] = [測量到的圖像] * [PSF]-1
即反卷積的過程就是求解[理想圖像]的過程。