牛巴貝斯抗體（Babesia）ELISA試劑盒
英文名稱：Cattle Babesia antibody ELISA kit
產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T
牛巴貝斯抗體（Babesia）ELISA試劑盒
英文名稱：Cattle Babesia antibody ELISA kit
產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
使用目的：
本試劑盒用于測(cè)定牛血清、血漿及相關(guān)液體樣本中巴貝斯蟲病表達(dá)。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中牛巴貝斯蟲病表達(dá)。用純化的牛巴貝斯蟲病抗體包被
微孔板，制成固相抗體，可與樣品中巴貝斯蟲病相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成
分后再與 HRP 標(biāo)記的巴貝斯蟲病抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗
滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終
的黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），與 CUTOFF 值相比較，從而判定
標(biāo)本中牛巴貝斯蟲病的存在與否。
牛巴貝斯抗體（Babesia）ELISA試劑盒標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1.編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽(yáng)性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1
孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）
2.加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照 50µl。然后在待測(cè)樣品孔先
加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測(cè)樣品 10µl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不
觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，
3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl，空白孔除外。
7.溫育：操作同 3。
8.洗滌：操作同 5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
計(jì)算和結(jié)果判定：
試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10
臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品 OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為巴貝斯蟲病陰性
陽(yáng)性判定：樣品 OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為巴貝斯蟲病陽(yáng)性
。
注意事項(xiàng)
1．操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物請(qǐng)避光保存。
6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，參考波長(zhǎng)為 630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸，使用時(shí)必須
注意安全。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：牛巴貝斯抗體（Babesia）ELISA試劑盒6 個(gè)月
