大腸埃希氏菌定義
大腸埃希氏菌是指能產(chǎn)生β-半乳糖苷酶(β-D-galactosidase)分解ONPG(Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside)使培養(yǎng)液呈黃色,能產(chǎn)生β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase)分解MUG(4-methyl-umbelliferyl-β-D-glucuronide)使培養(yǎng)液在波長366nm紫外光下產(chǎn)生熒光的細菌。
檢測重要性
《生活飲用水標準檢驗方法》GB/T 5750-2006中將大腸埃希氏菌列入檢測項目中。并在解讀《生活飲用水衛(wèi)生標準》GB5749-2006中闡述:“只有埃希氏大腸桿菌是糞源特異性的,是準確和專一的糞便污染指示”。
二、用途 :大腸埃希氏菌測定熒光觀察使用方法:插上電源,將經(jīng)過24小時培養(yǎng)后的EC-MUG管在燈下照射,如有藍色熒光產(chǎn)生則為大腸埃希氏菌陽性管;
暗箱式:BOT-UVIIIA
一、技術(shù)參數(shù):
1、電壓:220v 50HZ
2、功率:8W*2
3、波長:366nm
4、濾光片:200X50 mm
5、輻照:30CM內(nèi)強度約為1480μW/cm2
6、防紫外線觀察窗:160*80mm
8、具有過流,過壓保護裝置
9、規(guī)格尺寸:385X340X330mm
10、重量5Kg
11、*的內(nèi)部黑色涂層設(shè)計,觀察更清晰。
三、注意事項:每次觀察時,用一個沒開封的EC-MUG管和被測的EC-MUG管在紫外光燈同時觀察,如果被測的EC-MUG管產(chǎn)生熒光,在紫外光燈下與沒開封的EC-MUG管比較,有明顯的區(qū)別。每次測試完后將電源拔掉。
四、具體方法:取供試液10ml(相當于供試品1g、1ml),直接或處理后接種至適量(不少于100ml)的膽鹽乳糖培養(yǎng)基中,培養(yǎng)18--24小時,必要時可延長至48小時.
取上述培養(yǎng)物0.2ml,接種至含5mlMUG培養(yǎng)基的試管內(nèi),培養(yǎng),于5小時、24小時在366nm紫外線下觀察,同時用未接種的MUG培養(yǎng)基作本底對照.若管內(nèi)培養(yǎng)物呈現(xiàn)熒光,為MUG陽性,不呈現(xiàn)熒光,為MUG陰性.觀察后,沿培養(yǎng)管的管壁加入數(shù)滴靛基質(zhì)試液,液面呈玫瑰紅色,為靛基質(zhì)陽性,呈試劑本色,為靛基持陰性.本底對照應為MUG陰性和靛基質(zhì)陰性.
如MUG陽性,靛基質(zhì)陽性,判供試品檢出大腸埃希菌;如MUG陰性,靛基質(zhì)陰性,判供試品未檢出大腸埃希菌;如MUG陽性,靛基質(zhì)陰性,或MUG陰性,靛基質(zhì)陽性,則應取膽鹽乳糖培養(yǎng)基的培養(yǎng)物劃線接種于曙紅*瓊脂培養(yǎng)基或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基的平板上,培養(yǎng)18--24小時.
若平板上無菌落生長,或生長的菌落與表所列的菌落形態(tài)特征不符,判供試品未檢出大腸埃希菌.若平板上生長的菌落與表所列的菌落形態(tài)特征相符或疑似,應進行分離,純化,染色鏡檢和適宜的生化試驗,確認是否為大腸埃希菌.
大腸菌形態(tài)特征
用曙紅*培養(yǎng)基:呈紫黑色、淺紫色、藍紫色或粉紅色,菌落中心呈深紫色或無明顯暗色中心,圓形,稍凸起,邊緣整齊,表面光滑,濕潤,常有金屬光澤