大鼠己糖激酶(HK)elisa試劑盒組成:
試劑盒組成 | 48T | 96T | 保存 |
說明書 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片(48) | 2片(96) | |
密封袋 | 1個 | 1個 | |
酶標(biāo)包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
酶標(biāo)試劑 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
樣品稀釋液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
終止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
濃縮洗滌液 | (20倍)20ml×1瓶 | (30倍)20ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
大鼠己糖激酶(HK)elisa試劑盒自備材料:
1. 酶標(biāo)儀。
2. 自動或者手工洗板機(jī)。
3. 恒溫箱。
4. 可調(diào)節(jié)移液器及吸頭,一次檢測樣品較多時,用多通道移液器。
5. 干凈的試管和Eppendof管。
大鼠己糖激酶(HK)elisa試劑盒操作步驟:
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照圖表在小試管中進(jìn)行稀 釋。
2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、 待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl, 然后再加待測樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡 量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復(fù) 5 次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同 3。
8.洗滌:操作同 5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
大鼠己糖激酶(HK)elisa試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制注意事項:
1、樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出來的,所以首先要把做標(biāo)準(zhǔn)曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事,否則后面的實驗結(jié)果無從談起。
2、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個比較大的跨度,并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度,即樣品的濃度要在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍之內(nèi),包括上限和下限。而對于呈S型的標(biāo)準(zhǔn)曲線,盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度zui陡段,即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。
3、采用倍比稀釋法配制標(biāo)準(zhǔn)曲線中的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度,ELISA試劑盒這樣就能夠保證標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的偏離。
4、檢測標(biāo)準(zhǔn)樣品時,應(yīng)按濃度遞增順序進(jìn)行,以減少高濃度對低濃度的影響,提高準(zhǔn)確性。
5、標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品數(shù)一般為7個點,但至少要保證有5個點。
6、做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒炓蟛煌兴儎樱话銇碚f,相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.98,對于有些實驗,至少要0.99甚至是0.999.
大鼠己糖激酶(HK)elisa試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線選擇什么擬合方程:
1.在S曲線的低濃度部門可以用乘冪方程很好的擬合,中低濃度部門可以用直線方程,中間部門可用對數(shù)方程,而中后段可用四參數(shù)。免疫檢測時尺度點(可以是倍比稀釋的,也可以不是)濃度假如和相應(yīng)的吸光度(OD)值假如能夠呈現(xiàn)直線關(guān)系當(dāng)然是的了,這時可以通過EXELL等利便的獲得擬合曲線,進(jìn)而推算出樣品的濃度值。
2.關(guān)于尺度曲線的擬合方式,直線、二次曲線、三次曲線、指數(shù)、對數(shù)等雖都可用于ELISA及其它生物學(xué)反應(yīng)中的曲線擬合,但都只合用于曲線的一部門,有的合用于前半段,有的合用于后半段,有的合用于中間一段,而Logistic曲線則對曲線的全部都有較好的合用性。
3.在一個長的區(qū)間內(nèi),Logistic應(yīng)該都能擬合得較為理想。假如用來定量,S形曲線的中間段(較陡處)是比較好的,而兩真?zhèn)€平坦部門計算誤差會大,有時甚至?xí)艽蟆S糜诿庖邫z測的所謂“尺度曲線"實在稱為擬合曲線比較合適。目前上zui流行的免疫檢測擬合方式是“四參數(shù)邏輯擬合",用這種擬合方式往往能夠比較精確的反映濃度和吸光度的曲線關(guān)系,從而進(jìn)一步比較準(zhǔn)確的獲得樣品中待測物質(zhì)的濃度值。但我們做免疫檢測很少有時候能夠有這么理想的情況,標(biāo)品濃度和相應(yīng)OD值往往是"S"型的曲線關(guān)系,這時就不能用直線擬合的方式了,而對擬合方法進(jìn)行選擇就是必要的了。樞紐在于你的尺度曲線做到了S形的哪一部門,你想檢測的樣品濃度在曲線的哪一部門。當(dāng)然,假如用于定量,仍是在中間一段較好。但建模型是一回事,ELISA試劑盒而用它來定量是另一回事。這些方法固然沒有一種方法可以通用,但也都可以用。但并不是說它就是*的。事實上不僅是ELISA,其它良多生物學(xué)反應(yīng)都是S形曲線,也都可以用Logistic曲線擬合。
上海百蕊是專業(yè)的ELISA試劑盒銷售供應(yīng)商,有專門的技術(shù)部門,全程提供技術(shù)指導(dǎo)和免費代測服務(wù),提供售后服務(wù),咨詢。
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