【儀表網(wǎng) 行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)】國(guó)家糧食和物資儲(chǔ)備局組織起草的《糧油檢驗(yàn) 油料油脂中黃曲霉毒素B1的測(cè)定 熒光定量快速檢測(cè)法》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)已形成征求意見(jiàn)稿，現(xiàn)向社會(huì)公開(kāi)征求意見(jiàn)，截止日期為2024年2月8日。
 

　　黃曲霉毒素是黃曲霉和寄生曲霉等在生長(zhǎng)繁殖過(guò)程中產(chǎn)生的次生有毒代謝產(chǎn)物，是雙呋喃環(huán)類毒素，其衍生物有約 20 種，主要是 B1、B2、G1、G2、M1、M2 等。黃曲霉毒素被世界衛(wèi)生組織癌癥研究機(jī)構(gòu)劃定為一類天然存在的致癌物，其中以 B1 的毒性最大，致癌性最強(qiáng)。糧食和植物油料均會(huì)受到黃曲霉毒素的污染，尤其是花生和玉米更容易被污染。在花生油和玉米油的生產(chǎn)中，原料花生仁和玉米胚中的黃曲霉毒素會(huì)轉(zhuǎn)移至花生油、玉米油和花生餅粕、玉米餅粕中，對(duì)食用油脂和飼料餅粕的質(zhì)量安全造成威脅。GB 2761-2017《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中真菌毒素限量》中對(duì)花生和玉米胚及其油脂中 AFB1 做出≤20µg/kg 限量要求。
 

　　GB 5009.22-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中黃曲霉毒素 B 族和 G 族的測(cè)定》中列出了 5 種檢測(cè)方法，即第一法同位素稀釋液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，第二法高效液相色譜-柱前衍生法，第三法高效液相色譜-柱后衍生法，第四法酶聯(lián)免疫吸附篩查法，第五法為薄層色譜法。其中的高效液相色譜法、酶聯(lián)免疫吸附法以高靈敏度、精密度和便于自動(dòng)化而被應(yīng)用于油脂企業(yè)。然而，高效液相色譜法檢測(cè)成本高，儀器價(jià)格高，維護(hù)費(fèi)用高，分析時(shí)間長(zhǎng)，前處理復(fù)雜；酶聯(lián)免疫吸附法雖然在檢測(cè)成本上略好，但準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性卻有待提高。
 

　　近年來(lái)，黃曲霉毒素 B1 快速檢測(cè)方法已在油脂生產(chǎn)企業(yè)廣泛使用，它具有操作簡(jiǎn)單、樣品用量少、測(cè)定速度快、重現(xiàn)性好、結(jié)果可靠等特點(diǎn)，尤其在油料、油脂、餅粕的日常生產(chǎn)檢驗(yàn)，特別是其高密度檢測(cè)中顯現(xiàn)更大的優(yōu)勢(shì)。并且，黃曲霉毒素 B1 快檢法也已普遍應(yīng)用于糧食和飼料領(lǐng)域，并出臺(tái)了多個(gè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和地方標(biāo)準(zhǔn)，包括：LS/T 6111-2015 《糧油檢驗(yàn) 糧食中黃曲霉毒素 B1 測(cè)定 膠體金快速定量法》，NY/T 2550-2014 《飼料中黃曲霉毒素 B1 的測(cè)定 膠體金法》，DB36/T 1024-2018 《飼料中黃曲霉毒素的快速篩查 膠體金快速定量法》。因此，從生產(chǎn)實(shí)際出發(fā)，油料油脂領(lǐng)域也需要把黃曲霉毒素 B1 快檢法提升為標(biāo)準(zhǔn)方法，并加以推廣應(yīng)用，為食用植物油生產(chǎn)中 AFB1 實(shí)時(shí)檢測(cè)和監(jiān)控提供支持。此外，糧食和飼料所采用的快檢標(biāo)準(zhǔn)方法多為膠體金法，膠體金法只能實(shí)現(xiàn)定性和半定量，而熒光定量法能夠?qū)崿F(xiàn)指標(biāo)定量的快速檢測(cè)，能夠更精準(zhǔn)的對(duì)黃曲霉毒素進(jìn)行監(jiān)控。因此制定油料油脂生產(chǎn)中黃曲霉毒素 B1 熒光定量快速檢測(cè)方法是非常必要的，對(duì)可靠監(jiān)控油料油脂生產(chǎn)中黃曲霉毒素 B1 風(fēng)險(xiǎn)、實(shí)現(xiàn)糧油行業(yè)的高質(zhì)量發(fā)展具有重要意義。
 

　　本文件按照GB/T 1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件起草單位：河南工業(yè)大學(xué)，費(fèi)縣中糧油脂工業(yè)有限公司，中糧油脂控股有限公司，河北玉星食品有限公司，長(zhǎng)壽花食品股份有限公司。
 

　　本文件規(guī)定了黃曲霉毒素B1的熒光定量快速檢測(cè)方法的原理、試劑、儀器設(shè)備及材料、樣品制備、樣品測(cè)定、結(jié)果判定和檢測(cè)限。本文件適用于花生仁、玉米胚等油料及其油脂和餅粕中黃曲霉毒素B1的快速檢測(cè)。
 

　　原理：
 

　　采用熒光側(cè)向免疫層析方法學(xué)原理，將待測(cè)樣品滴加在加樣區(qū)，樣品中的黃曲霉毒素B1與結(jié)合墊中的熒光微球標(biāo)記黃曲霉毒素B1抗體結(jié)合并通過(guò)毛細(xì)作用向前層析，達(dá)到檢測(cè)區(qū)后，檢測(cè)線T線上固定的黃曲霉毒素B1抗原與剩余未結(jié)合的熒光微球標(biāo)記黃曲霉毒素B1抗體結(jié)合。檢測(cè)線T線上結(jié)合的熒光微球標(biāo)記黃曲霉毒素B1抗體的量與樣品中黃曲霉毒素B1的濃度成反比。層析結(jié)束后，采用熒光定量快速檢測(cè)儀讀取T線和C線的熒光強(qiáng)度并計(jì)算T/C值，通過(guò)儀器內(nèi)置的標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出樣品中黃曲霉毒素B1的含量并判斷陰陽(yáng)性。
 

　　儀器設(shè)備及材料：
 

　　實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器、設(shè)備及材料。
 

　　1.粉碎機(jī)：可使試樣粉碎后全部通過(guò)20目標(biāo)準(zhǔn)篩。
 

　　2.天平：分度值 0.01g。
 

　　3.漩渦振蕩器。
 

　　4.黃曲霉毒素 B1熒光定量快速檢測(cè)卡(2)：具體儲(chǔ)存條件參照使用說(shuō)明。
 

　　5.離心機(jī)。
 

　　6.恒溫孵育器：孵育溫度 37℃，工作條件：環(huán)境溫度 5-37℃，環(huán)境濕度不大于80%。
 

　　7.熒光定量快速檢測(cè)儀(3)：工作條件：環(huán)境溫度 5-40℃，環(huán)境濕度不大于 90%。
 

　　8.ID 卡。
 

　　9.條形碼。
 

　　樣品測(cè)定：
 

　　1.檢測(cè)前準(zhǔn)備
 

　　1.1 將待用黃曲霉毒素B1熒光定量快速檢測(cè)卡、樣品提取液、樣品稀釋液恢復(fù)至室溫。
 

　　1.2 將檢測(cè)卡恒溫孵育器開(kāi)機(jī)，待溫度升至37℃后即可使用。
 

　　1.3 將熒光定量快速檢測(cè)儀開(kāi)機(jī)，預(yù)熱10min，插入本批次產(chǎn)品所對(duì)應(yīng)的ID卡(每批次產(chǎn)品只需插一次即可)，如需切換檢測(cè)項(xiàng)目，掃描相應(yīng)項(xiàng)目和批次的條形碼即可。
 

　　2.樣品檢測(cè)
 

　　2.1 從包裝袋中取出黃曲霉毒素B1熒光定量快速檢測(cè)卡，水平置于檢測(cè)卡恒溫孵育器上。
 

　　2.2 用移液槍吸取稀釋后的待測(cè)液100ul加到檢測(cè)卡上的加樣孔中，開(kāi)始計(jì)時(shí)孵育8min。
 

　　2.3 孵育結(jié)束后，將檢測(cè)卡插入熒光定量快速檢測(cè)儀中，按讀數(shù)鍵或觸摸屏幕讀數(shù)即可。
 

　　結(jié)果判定：
 

　　1.定量檢測(cè)結(jié)果將呈現(xiàn)于熒光定量快速檢測(cè)儀液晶顯示屏上，同時(shí)可按打印鍵打印獲得紙質(zhì)的檢測(cè)報(bào)告(平行測(cè)定次數(shù)可根據(jù)使用方質(zhì)量控制要求進(jìn)行調(diào)整，定量檢測(cè)結(jié)果保留2位小數(shù))。
 

　　2.陰性(-)：檢測(cè)結(jié)果

　　3.陽(yáng)性(+)：檢測(cè)結(jié)果≥cut-off值(可根據(jù)使用方質(zhì)量控制要求進(jìn)行調(diào)整)。
 

　　4.無(wú)效：檢測(cè)儀報(bào)錯(cuò)，則本次檢測(cè)無(wú)效，需重新測(cè)試。
 

　　5.檢測(cè)結(jié)果超出定量范圍的上限，可取離心后的上清液(6.2.4)，用樣品提取液稀釋5倍后混勻，再按(6.2.5)檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果乘以5，即為樣品中黃曲霉毒素B1的最終含量。
 

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