檢測(cè)

辣根過氧化物酶 (HRP) 和堿性磷酸酶 (ALP) 是 ELISA 分析中使用*泛的兩種酶。

要考慮到某些生物材料具有高水平的內(nèi)源酶活性（例如肺泡細(xì)胞中的高水平 ALP、紅細(xì)胞中的高水平過氧化物酶），這可能會(huì)導(dǎo)致非特異性信號(hào)。如有必要，用左旋咪唑（針對(duì) ALP）或用 0.3% H2O2 的甲醇溶液（針對(duì)過氧化物酶）進(jìn)行另外的阻斷處理。

ALP 底物
對(duì)硝基苯磷酸鹽 (pNPP) 是大多數(shù)應(yīng)用中廣泛使用的底物。在室溫下孵育 15-30 分鐘后，在 405 nm 處測(cè)定硝基苯酚呈現(xiàn)的黃色，加入等體積的 0.75 M NaOH 可終止反應(yīng)。

HRP 顯色液
HRP 的底物為過氧化氫。過氧化氫的裂解與氫供體的氧化偶聯(lián)，反應(yīng)期間氫供體的氧化使顏色發(fā)生變化。

TMB（3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺）
每孔添加 TMB 溶液，孵育 15–30 分鐘，添加等體積的終止液 (2 M H2SO4)，然后在 450 nm 處讀取光密度。

OPD（鄰苯二胺2鹽酸鹽）
在 492 nm 處測(cè)定終產(chǎn)物。底物對(duì)光敏感，應(yīng)避光保存。

ABTS（2,2'-聯(lián)氮-雙-[3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸]二銨鹽）
終產(chǎn)物為綠色，可在 416 nm 處測(cè)定光密度。

某些酶底物被認(rèn)為是有害的（潛在致癌物），因此始終要小心處理并佩戴手套。