操作步驟：
夾心法，一般的操作步驟為:
將具有專一性的抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體;
加入待測檢體，檢體中若含有待測的抗原，則其會與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結(jié);
洗去多余待測檢體，加入另一種對抗原專一的一次抗體，與待測抗原進行鍵結(jié);
洗去多余未鍵結(jié)一次抗體，加入帶有酶的二次抗體，與一次抗體鍵結(jié);
洗去多余未鍵結(jié)二次抗體，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果;
間接法，一般的操作步驟為：
將已知的抗原固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余的抗原。
加入待測檢體，檢體中若含有待測的一次抗體，則其會與塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結(jié)。
洗去多余待測檢體，加入帶有酶的二次抗體，與待測的一次抗體鍵結(jié)。
洗去多余未鍵結(jié)二次抗體，加入酶底物使酶呈色，藉儀器測定塑膠盤中的吸光值，以評估有色終產(chǎn)物的含量即可測量待測抗體的含量。
競爭法，其操作步驟為：
將具有專一性的抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體
加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結(jié)
加入帶有酶的抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結(jié)，由于塑膠孔盤上固著的抗體數(shù)量有限，因此當(dāng)檢體中抗原的量越多，則帶有酶的抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結(jié)，即所謂競爭法之由來。