瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞-上海邦景實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	BJ-X97680

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產(chǎn)品名稱	瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞
規(guī)格	5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號(hào)	BJ-X97680

商品屬性：

名稱 瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞

2.組織來(lái)源：皮膚組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞分離自皮膚瘢痕疙瘩組織；瘢痕疙瘩，俗稱疤痕疙瘩，是皮膚傷口愈合或不明原因所致皮膚損傷愈合后所形成的過(guò)度生長(zhǎng)的異常瘢痕組織，目前學(xué)術(shù)界認(rèn)為各種原因?qū)е碌鸟：廴缇哂幸韵绿攸c(diǎn)，可診斷為瘢痕疙瘩：①病變超過(guò)原始皮膚損傷范圍；②呈持續(xù)性生長(zhǎng)；③高起皮膚表面、質(zhì)硬韌、顏色發(fā)紅的結(jié)節(jié)狀、條索狀或片狀腫塊。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái)。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長(zhǎng)，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng)，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞同正常皮膚成纖維細(xì)胞在形態(tài)上沒有表現(xiàn)出明顯的差異。瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)同正常皮膚成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)沒有明顯的差別。癜痕成纖維細(xì)胞對(duì)血清的依賴性低于正常皮膚成纖維細(xì)胞。

5.方法簡(jiǎn)介：

()實(shí)驗(yàn)室分離的人瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞采用先消化、后-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè)：

()實(shí)驗(yàn)室分離的人瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號(hào)CM-H235

換液頻率每2-3天換液一次；

生長(zhǎng)特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣

傳代特性可傳3-5代左右

消化液0.25%

細(xì)胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

圖片13.jpg

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

大鼠α2巨球蛋白(α2-MG)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人紅細(xì)胞生成素受體(EPOR)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人β-淀粉樣前體蛋白(β-APP)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

牛血清白蛋白(BSA)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

猴胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

大鼠抗IVIgG抗體免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

倉(cāng)鼠促卵泡素(FSH)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

消毒液中和肉湯英文名稱：Disinfectant Neutralization Broth 產(chǎn)品規(guī)格：250g

含青接觸皿培養(yǎng)基平板英文名稱：產(chǎn)品規(guī)格：6.5cm*

瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞Fusobacterium necrophorum壞死梭桿LAMP試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周BDNF 腦源神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子抗體規(guī)格: 0.1ml

Candida albicans白色念珠探針法熒光定量PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周SEMCAP3/LNX3 SEMCAP3蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

Avibacterium paragallinarum副雞禽桿染料法熒光定量PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周NSBP1 核小體結(jié)合蛋白1抗體規(guī)格: 0.1ml

小麥源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒種源性檢測(cè)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周USP28 泛素特異性蛋白28抗體規(guī)格: 0.2ml

Camel Pox Virus(CPV駱駝痘病毒探針法熒光定量PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Phospho-Ack1(Tyr859/860) 磷酸化Ack1抗體 0.1ml

Avian Infectious Bronchitis Virus(AIBV)禽傳染性支氣管炎病毒793B型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Mouse Anti-rabbit IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記的小鼠抗兔IgG 規(guī)格: 0.3ml

哺乳動(dòng)物源性成分PCR試劑盒種源性檢測(cè)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周phospho-GIT1(Tyr554) 磷酸化G蛋白偶聯(lián)受體激相互作用蛋白1 規(guī)格: 0.1ml

Feline Calicivirus(FCV)貓杯狀病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周CDX2 尾型同源盒轉(zhuǎn)錄因子2抗體規(guī)格: 0.1ml

Ureaplasma diversum差異脲原體LAMP試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周Rabbit Anti-rat IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

Ehrlichiae spp.艾利希體屬（埃立克體屬）通用LAMP試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 1-2周PTP/PTPase/CD148 蛋白酪磷酸CD148抗體規(guī)格: 0.2ml

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。