細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

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商品屬性：

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

牛胰島素樣生長因子1(IGF-1)免疫試劑盒進口、組裝

人細胞角蛋白18(CK-18)免疫試劑盒進口、組裝

人磷脂A2受體抗體(IgG)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

人瓜免疫試劑盒進口、組裝

人β2微球蛋白(BMG/β2-MG)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

雞促甲狀腺素(TSH)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

大鼠熱休克蛋白60(Hsp-60)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

大鼠白介素1受體樣1(IL1RL1)免疫試劑盒進口、組裝

Baird-Parker瓊脂基礎(chǔ)顆粒 英文名稱：Baird-Parker Agar Base 產(chǎn)品規(guī)格：300ml/袋ows\system32\EhStorShell.dll

小鼠腸微血管內(nèi)皮細胞Radix puerariae葛根LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周ADAR1 (C-terminus)  雙鏈RNA苷酸脫氨基抗體（C端） 0.2mlMouse Anti-human IgG/RBITC  羅丹明標記的小鼠抗人IgG 規(guī)格: 0.3ml

Encephalitozoon spp.腦胞內(nèi)原蟲屬通用·LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Mouse Anti-human IgG/APC  APC標記的小鼠抗人IgG 規(guī)格: 0.1mlC10orf132/GOLGA7B  10號染色體開放閱讀框132抗體 規(guī)格: 0.2ml

Mycobacterium hominis人分枝桿探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周ANKRD12  錨蛋白重復結(jié)構(gòu)域蛋白12抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-human IgG/AP  堿性磷酸（AP）標記的兔抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml

Anguina agrostis剪股穎粒線蟲PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Integrin Alpha V  整合素αV抗體 規(guī)格: 0.2mlMAP3K7IP1/TAB1  轉(zhuǎn)化生因子β活化激結(jié)合蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Campylobacter laridis海鷗彎曲桿LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負20度 一年 2-3周phospho-c-Jun(Thr91)  磷酸化原基因c-Jun抗體 規(guī)格: 0.1mlCaspase 4/Caspase 11  半胱胺酸蛋白4/11抗體 規(guī)格: 0.2ml

Influenza Virus A甲型流感（）病毒H7N9亞型 RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Fibrillarin  核仁纖維蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlRAB-14  RAS相關(guān)蛋白基因Rab14抗體 0.2ml

Poplar Mosaic Virus(PopMV)楊樹花葉病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Gas1  生休止特定蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlITGB1BP2/CHORDC3  整合素β1結(jié)合蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Eperythrozoon humanus人附紅  體（人嗜血支原體）PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負20度 一年 2-3周LMO4  瘤自身抗原LMO4抗體 規(guī)格: 0.2mlIL-13  白介素13抗體 規(guī)格: 0.1ml

Avian Nephritis Virus 2(ANV-2)禽腎炎病毒2型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周CCR-1  細胞表面趨化因子受體1抗體 規(guī)格: 0.1mlRabbit anti-Guinea pig IgG whole serum  兔抗豚鼠IgG抗清 規(guī)格: 1ml

Phytophthora ramorum櫟樹猝死病PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Goat Anti-Mouse IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標記的羊抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlMouse Anti-Goat IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標記的小鼠抗羊IgG 規(guī)格: 0.1ml