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備試劑與收集血樣:
1. 收集標本:血清、血漿(EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存48 小時;更長時間須冷凍( -20 ℃或 -70 ℃ )保存,避免反復凍融。
2. 標準品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管,管加標本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反復作對倍稀釋,從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。
3. 10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。
4. 洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例:1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)
產品名稱 | 人嗜鉻蛋白A(CgA)elisa進口試劑盒 |
英文名稱 | Human chromogranin A (CgA) ELISA Kit |
貨號 | BJ-G10727 |
規(guī)格:96T/48T
特點:靈敏性高、特異性強、重復性好
用途:科研實驗等領域科學研究,不得用于臨床診斷
運輸:快遞(根據客戶要求,選擇具體的運輸方式)
試劑盒種屬:羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。
待檢樣本:體液、血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織勻漿、心房水標本等等
檢測程序:
1. 加樣:每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ,將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
樣本實驗前準備:
ELISA進口試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?/span>2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
實驗步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10 min;
3.水化: 切片經下行酒精水化,無水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修復: 根據抗體說明書推薦方法進行抗原修復,常采用高壓、微波(溫度達到 98~100℃)或酶消化修復法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復方法見附 1)* 注:有些抗原勿需修復,直接進入第 5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37℃濕盒中孵育 30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應用 DAB 溶液(試劑 F)顯色;
15.復染:自來水充分沖洗,復染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
大鼠角膜上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL氯唑沙宗質量規(guī)格:>98.5%,BRChlorzoxazone
Hep3B人肝癌細胞 Hep3B human hepatocarcinoma cells DMEM+10% FBS氯唑沙宗(標準品)質量規(guī)格:HPLC>98%,標準品Chlorzoxazone
IL18 Protein Human 重組人 IL18 / Ierleukin 18 / IGIF 蛋白 (GST 標簽)D-氨基葡萄糖鹽酸鹽質量規(guī)格:>98.5%,BRD-Glucosamine
NCI-H520(人肺鱗癌細胞) 5×106cells/瓶×2 A549 [A-549](肺癌細胞)奧卡西平質量規(guī)格:≥99.0%,BROxcarbazepine
CL-0448SW 1990(人胰腺癌細胞)5×106cells/瓶×2奧卡西平(標準品)質量規(guī)格:HPLC>99%,標準品Oxcarbazepine
MRC-5-EGFP+puro人胚肺成纖維細胞 MRC-5-EGFP+puro in human embryo lung fibroblasts MEM+10%Hyclone滅活血清+2ug/ml puromycin鹽酸喹那普利(標準品)質量規(guī)格:HPLC法含量測定Quinapril
TNFSF13B Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 BLyS / TNFSF13B / BAFF 蛋白 (Fc 標簽)愛普列特(標準品)質量規(guī)格:UV法含量測定Epristeride
人角膜上皮細胞 (HcorF)( 5×105 ) 293T, SV40轉化的人胚腎上皮細胞系 Human羥苯磺酸鈣(標準品)質量規(guī)格:含量測定Calcium dobesilate
人胰腺導管癌細胞;CFPAC-1異鼠李素-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷(標準品)質量規(guī)格:HPLC≥95%,標準品Isorhamnetin 3-glucoside-7-rhamnoside
BMPR1B Others Human 人 BMPR1B / ALK-6 (149-502) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 5'-tert-Butyldimethylsilyloxy 美洛昔康質量規(guī)格:美國進口5'-tert-Butyldimethylsilyloxy Meloxicam
786-O(人腎透明細胞癌細胞) 5×106cells/瓶×2SULFATE1MSTERILE無菌溶液生物技術級100ML10034-99-8RT
IL8 Others Human 人 IL-8 (aa 6-77) 人細胞裂解液 (陽性對照) 三基硅基 (TRIMqTHYLSILYL)MqTHYLlitxium 18-00-0
草魚腎細胞;GIKMcgnqsiuM 7439-92-4
AMPK Others Human 人 AMPK (G1/B1/A2) Heteroimer 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) TBEPOWDER-DIwo7iumTBE 緩沖液粉末包超級2 PackRT
CL-0258BC-019(人癌細胞)5×106cells/瓶×271098-88-9N-(本硒基)本 94%N-(pxenYLSELENO)PHTHALIMIDE
人嗜鉻蛋白A(CgA)elisa進口試劑盒CD160 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD160 人細胞裂解液 (陽性對照) 鉭試劑N-Benzoyl-N-phenylhydroxylamine質量規(guī)格:AR
CM-M013小鼠肺大靜脈內皮細胞*培養(yǎng)基100mL左西孟旦Levosimendan質量規(guī)格:>99%,BR
KYSE 150細胞,人食管鱗癌 人神經膠質瘤細胞,U251細胞 兔角膜前基質層成纖維細胞;RCFBF鋅試劑Zincon質量規(guī)格:AR
CCD-1095Sk(人浸潤性導管癌旁皮膚細胞) 5×106cells/瓶×2試劑Dithizone質量規(guī)格:AR
CD34 Others Human 人 CD34 人細胞裂解液 (陽性對照) 鎂試劑IMagnesonI質量規(guī)格:AR
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