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備試劑與收集血樣:
1. 收集標本:血清、血漿(EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存48 小時;更長時間須冷凍( -20 ℃或 -70 ℃ )保存,避免反復凍融。
2. 標準品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管,管加標本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反復作對倍稀釋,從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。
3. 10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。
4. 洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例:1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)
產品名稱 | 大鼠髓磷脂堿性蛋白(MBP)elisa進口試劑盒 |
英文名稱 | Rat myelin basic protein (MBP) ELISA Kit |
貨號 | BJ-G9742 |
規(guī)格:96T/48T
特點:靈敏性高、特異性強、重復性好
用途:科研實驗等領域科學研究,不得用于臨床診斷
運輸:快遞(根據客戶要求,選擇具體的運輸方式)
試劑盒種屬:羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。
待檢樣本:體液、血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織勻漿、心房水標本等等
檢測程序:
1. 加樣:每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ,將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
樣本實驗前準備:
ELISA進口試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?/span>2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
實驗步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10 min;
3.水化: 切片經下行酒精水化,無水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修復: 根據抗體說明書推薦方法進行抗原修復,常采用高壓、微波(溫度達到 98~100℃)或酶消化修復法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復方法見附 1)* 注:有些抗原勿需修復,直接進入第 5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37℃濕盒中孵育 30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應用 DAB 溶液(試劑 F)顯色;
15.復染:自來水充分沖洗,復染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
ICAM3 Others Human 人 CD50 / ICAM3 人細胞裂解液 (陽性對照) 4,4'-(六氟異亞丙基)二酞1(>98.0%(GC)(T))質量規(guī)格:>98.0%(GC)(T)4,4'-(Hexafluoroisopropylidene)diphthalic Anhydride
中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-5beta 41,2.5 CL5 Carrying P5b/dhfr3,3',4,4'-二苯酮四羧酸二酐(>96.0%(T))質量規(guī)格:>96.0%(T)3,3',4,4'-Benzophenonetetracarboxylic Dianhydride
RGMA Others Human 人 RGMA 人細胞裂解液 (陽性對照) 三環(huán)[6.4.0.02,7]十二烷-1,8:2,7-四羧酸二酐(>98.0%(GC))質量規(guī)格:>98.0%(GC)Tricyclo[6.4.0.02,7]dodecane-1,8:2,7-tetracarboxylic Dianhydride
A375 人惡性色素瘤細胞ε-己內酯(>99.0%(GC))質量規(guī)格:>99.0%(GC)ε-Caprolactone
C6-EGFP-puro(慢病毒構建穩(wěn)定株)大鼠腦膠質瘤細胞 C6-EGFP-puro (leiviral consuct stable sain) of rat brain glioma cells DMEM+10% FBS+2ug/ml puromycin四氫生物蝶呤(THB)二鹽酸質量規(guī)格:美國進口Tetrahydrobiopterin (THB) di
CD33 Others Mouse 小鼠 CD33 / Siglec-3 人細胞裂解液 (陽性對照) 硫氫化鈉水合物,英文名或英文縮寫:wo7ium xy7nosulfide hydrate,級別:3.5N,200-250目,規(guī)格:25克
MPC-83 胰腺腺泡細胞癌尿酸鈉 Uric acid salt 1198-77-2 1G 通用試劑
IMR-32人神經母細胞瘤細胞 IMR-32 human neuroblastoma cells MEM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBSL-半胱安醋酯言醋鹽 L-Cystqinq Mqthyl qstqr xy7nochloridq;Mqcystqinq xy7nochloridq;Mqthyl cystqinq xy7nochloridq;Mqthyl β-Mqrccptoclcninq xy7nochloridq;Mqthyl α-cMino-β-Mqrccptopropionctq xy7nochloridq;LJ-48 18298-63-2
THPO Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 Thrombopoietin / THPO / TPO 蛋白 (His 標簽)氫氧化鉀shēng huà shì jì容量:500克
人上皮細胞;MCF-10A 人前列腺平滑肌細胞*培養(yǎng)基 100mL7235-40-7β-胡蘿卜素~1600U/MG(-20℃)beta-Carotene
婆羅門牛皮膚成纖維樣細胞;BOS-3 神經母細胞瘤,SK-N-SH細胞 SW-13(腎上腺皮質腺癌細胞)光神霉素shēng huà shì jì容量:RT5克
EB病毒轉化的人B細胞;KMYM葡萄糖酸鋅 Zinc gluconate,98% 527-07-1 100G 通用試劑
GLIPR1 Others Human 人 GLIPR1 / RTVP1 人細胞裂解液 (陽性對照) 亞安基二醋;亞安二醋醋 IMinodiccqtic ccid;N-(CcrboxyMqthyl)glycinq;IDc 14-73-4
CM-M118小鼠虹膜色素上皮細胞*培養(yǎng)基100mL腸產毒培養(yǎng)基25克
IL3RA Others Canine 狗 IL3RA 人細胞裂解液 (陽性對照) 1520-96-3氘代苝PERYLENE-D12
大鼠髓磷脂堿性蛋白(MBP)elisa進口試劑盒人星形膠質細胞總RNAHA NA氯硝柳胺Niclosamide質量規(guī)格:>99%,BR
HAVCR2 Others Mouse 小鼠 TIM3 / HAVCR2 人細胞裂解液 (陽性對照) 氯硝柳胺(標準品)Niclosamide質量規(guī)格:HPLC>98%,標準品
化大家鼠肺成纖維細胞;NRm環(huán)丙沙星Ciprofloxacin質量規(guī)格:>99%,USP32,BR,可用于細胞培養(yǎng)
CRL細胞,人胰腺癌細胞 人舌癌細胞,Tca-8113細胞 小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-A5環(huán)丙沙星(標準品)Ciprofloxacin質量規(guī)格:HPLC>98%,標準品
IMR-32(人神經母細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×2泛昔洛韋Famciclovir質量規(guī)格:>98.5%,BR
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