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TREM2 是一種跨膜糖蛋白，由胞外免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域和胞質(zhì)部分，其中胞質(zhì)部分與 DAP12 結(jié)合，起到信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能。TREM2 有來(lái)自病原體的外源配體，還有暫時(shí)尚未明確的內(nèi)源配體。胞外配體結(jié)合會(huì)激活 TREM2，這反過(guò)來(lái)會(huì)激活 DAP12，從而導(dǎo)致胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)事件發(fā)生級(jí)聯(lián)反應(yīng)。具體而言，DAP12 包含一個(gè)基于免疫受體酪氨酸的激活基序 (ITAM)，其中酪氨酸殘基在 TREM2 結(jié)合配體時(shí)會(huì)被磷酸化。然后這會(huì)募集 Syk 激酶來(lái)激活下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子。

本文采用了 TREM2-/- 的小鼠對(duì) TREM2 在脂質(zhì)代謝以及 TREM2 缺失引起的小膠質(zhì)細(xì)胞的膽固醇堆積的來(lái)源進(jìn)行了探討。發(fā)現(xiàn)TREM2在小膠質(zhì)細(xì)胞脂質(zhì)代謝過(guò)程中的重要作用以及myelin是膽固醇堆積的重要來(lái)源。TREM2 正常表達(dá)的動(dòng)物和細(xì)胞在 TREM2 收到激活后，可以引起 DAP12 的自磷酸化，進(jìn)一步招募 SYK 蛋白并將其磷酸化，激活 SYK 信號(hào)通路，激活下游的 DAM 和脂類代謝的基因，從而將小膠紙細(xì)胞吞噬的 myelin 膽固醇正常代謝為自由化的膽固醇。本文前期的大量的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)都驗(yàn)證了 TREM2 的功能，同時(shí)也構(gòu)建了SYK的磷酸化檢測(cè)平臺(tái)，通過(guò) ALPHA surefire ultra 的技術(shù)對(duì) SYK 的磷酸化水平進(jìn)行定量分析。

ALPHA surefire ultra技術(shù)是珀金埃爾默公司基于ALPHA平臺(tái)開發(fā)出的細(xì)胞磷酸化檢測(cè)工具。新的 AlphaLISA Surefire Ultra 采用成熟的 CaptSureTM 技術(shù)代替 Protein A，不僅實(shí)現(xiàn)了試劑盒抗體捕獲的特異性，而且具有更低的檢測(cè)背景。新的試劑盒利用 AlphaLISA 受體微珠代替 AlphaScreen 受體微珠，對(duì)血紅蛋白淬滅干擾具有更加出色的光譜特性。ALPHA 檢測(cè)本身非常簡(jiǎn)單。

ALPHA surefire Ultra 平臺(tái)的特點(diǎn)：

步驟簡(jiǎn)單，減少時(shí)間和人工

細(xì)胞樣本經(jīng)過(guò)刺激、裂解后，只需要將試劑組分加入裂解液，無(wú)需任何多余的洗滌步驟。

高靈敏度及定量化檢測(cè)

檢測(cè)靈敏度大于等于 Western Blot 方法；可以檢測(cè)過(guò)表達(dá)蛋白靶點(diǎn)及內(nèi)源水平表達(dá)的蛋白；可以使用穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系或原代細(xì)胞及干細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)。

高Z'值和信號(hào)窗口

可以獲得更高的信噪比、更低的cv以及更穩(wěn)定的assay。

通量高的同時(shí)上樣量少

可以兼容 96、384 或 1536 孔板的不同檢測(cè)模式，適合于微孔板樣品，樣品只需 5uL 或以下的體積。

本文中將 TREM2 和 DAP12 共同表達(dá)在 293T 細(xì)胞中共同表達(dá)，以此為平臺(tái)使用不同的脂類和蛋白類物質(zhì)進(jìn)行刺激，然后檢測(cè)其 Syk 的磷酸化水平的變化。

珀金埃爾默同時(shí)提供Phospho-Syk (Tyr352)和total Syk檢測(cè)試劑盒。

同時(shí) ALPHA 新的技術(shù)也支持磷酸化蛋白和總蛋白同時(shí)檢測(cè)：

Phospho-Syk (Tyr352)和total Syk檢測(cè)試劑盒

長(zhǎng)按識(shí)別下方二維碼，獲取詳細(xì)產(chǎn)品信息

Phospho-Syk (Tyr352)

total Syk

另外還有Syk的下游激活的PI3K、ERK、NFκB等信號(hào)通路，根據(jù)具體環(huán)境，這些信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)級(jí)聯(lián)可差異性和協(xié)同性參與，從而影響各種小膠質(zhì)細(xì)胞功能，包括受體介導(dǎo)的吞噬、β-catenin 和 mTOR 復(fù)合體 1 介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控、通過(guò) PIP 2/3 介導(dǎo)的 AKT 和 mTOR 復(fù)合體 2 激活實(shí)現(xiàn)的代謝平衡、導(dǎo)致促炎性分子轉(zhuǎn)錄調(diào)控的 RAS/MEK/ERK 激活，以及導(dǎo)致肌動(dòng)蛋白重構(gòu)的鈣調(diào)節(jié)。除了這些信號(hào)通路以外神經(jīng)退行性疾病也會(huì)導(dǎo)致 Tau 蛋白等的磷酸化水平發(fā)生變化。這些變化都可以通過(guò) ALPHA surefire ultra 的平臺(tái)進(jìn)行定量檢測(cè)。

同時(shí)珀金埃爾默公司還提供高品質(zhì)的 ALPHA Assay 檢測(cè)設(shè)備：

EnVision多標(biāo)記微孔板讀板儀

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EnSight多標(biāo)記微孔板讀板儀

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Victor Nivo多標(biāo)記微孔板讀板儀

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在淀粉樣蛋白斑中，TREM2 是小膠質(zhì)細(xì)胞的吞噬功能的關(guān)鍵。本文還進(jìn)行了 Myelin 被小膠質(zhì)細(xì)胞的吞噬實(shí)驗(yàn)，該實(shí)驗(yàn)采用Opera Phenix HCS System和 HarmonyHCA Software 進(jìn)行自動(dòng)化拍攝和定量分析。

Opera Phenix 高內(nèi)涵系統(tǒng)

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