當前位置:藍景科信河北生物科技有限公司>>試劑標物>>常用實驗室試劑>> DM3832/96微量核酸提取試劑盒(毛發(fā)/指甲)
Step1、材料準備和前處理【指甲】1.將指甲(趾甲)剪成1x1 mm左右的小片段(樣本量≤50 mg),全部轉(zhuǎn)移至1.5 mL離心管(自備)中,加入300 μL裂解液1和20 μL蛋白酶K,浸沒樣本,充分渦旋混勻或搖晃混勻。2.將離心管置于65℃,震蕩(900~1,200 rpm)孵育2 h。3.待2 h消化完畢后,12,000 rpm離心3 min,使管蓋以及管壁上的液體離心至管底,待用。【毛發(fā)】1.取 1~3 根毛發(fā)剪成2 mm左右的小片段,全部轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管(自備)中,加入300 μL裂解液1和20 μL蛋白酶K,浸沒樣本,充分渦旋混勻或搖晃混勻。2.將離心管置于65℃,震蕩(900~1,200 rpm)孵育2 h。3.待2 h消化完畢后,12,000 rpm 離心3 min,使管蓋以及管壁上的液體離心至管底,待用。Step2、核酸提取1.從消化完畢后,離心后的1.5 mL離心管中吸取所有上清液至新的離心管中,加入20 μL磁珠懸浮液和600 μL的結(jié)合液2,顛倒混勻5 min。2.將離心管放置于磁力架上靜置30 sec,磁珠吸附后,小心吸去液體。3.將離心管從磁力架上取下,加入500 μL洗滌液3,振蕩混勻2 min。4.將離心管放置于磁力架上靜置30 sec,磁珠吸附后,小心吸去液體。5.將離心管從磁力架上取下,加入500 μL洗滌液4,振蕩混勻2 min。6.將離心管放置于磁力架上靜置30 sec,磁珠吸附后,小心吸去液體。7.將離心管從磁力架上取下,加入500 μL洗滌液5,振蕩混勻2 min。8.將離心管放置于磁力架上靜置30 s,磁珠吸附后,小心吸去液體。9.重復步驟7和8一次。10.將離心管于磁力架上,室溫晾干2~3 min。注意:乙醇殘留會抑制后續(xù)的酶反應,所以晾干時要確保乙醇揮發(fā)干凈。但也不要干燥太長時間,以免難以洗脫DNA。11.將離心管從磁力架上取下,加入50~100 μL洗脫液6,振蕩混勻,置于65℃,震蕩(900~1,200 rpm)孵育15 min。12.將離心管放置于磁力架上靜置2 min,磁珠吸附后,小心將DNA溶液轉(zhuǎn)移至一個新離心管中,并于適當條件保存。
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