高效液相色譜法（HPLC）現(xiàn)已成為有機(jī)化學(xué)分析的重要手段之一。同樣，在食品分析中，無論是殘留分析還是成分分析，高效液相色譜儀也已成為*的分析儀器。關(guān)于高效液相色譜儀的操作重要的有三點：脫氣、過濾和沖洗。在這里將重點解說脫氣的操作注意事項，希望能對新從事高效液相色譜儀分析的工作者有一點幫助。
流動相脫氣對于避免高效液相色譜儀系統(tǒng)出問題，順利得到一個理想的數(shù)據(jù)是一個很有效的措施。高效液相色譜儀系統(tǒng)內(nèi)是不希望有氣泡存在的。高效液相色譜儀泵在輸送液體時要產(chǎn)生很大的力量，由于氣體的壓縮比與液體相比大的多，因而當(dāng)氣泡存在時，你將觀察到瞬間的流速降低和系統(tǒng)壓力下降。如果這個氣泡足夠大，液相泵將不能輸送任何溶劑，而且如果壓力低于預(yù)先設(shè)定的壓力低限，泵將停止工作。通用儀器自主研發(fā)的四元恒流泵，采用高精度伺服電機(jī)驅(qū)動精密滾珠絲桿技術(shù)，去掉混合器，減少死體積；氣/液膜分離技術(shù)設(shè)計的在線脫氣機(jī)能使脫氣效率更高、更穩(wěn)定。
當(dāng)一個氣泡通過*時，由于系統(tǒng)壓力大，氣泡通常會溶解在流動相溶液中，隨流動相通過柱子。但是到達(dá)檢測器流通池時系統(tǒng)壓力又恢復(fù)到了大氣壓，因而氣泡可能在檢測器流通池中又顯現(xiàn)，在色譜圖上會出現(xiàn)不規(guī)律的毛刺。紫外/可見光（UV/VIS）檢測器的液相色譜圖中的噪音毛刺通常是氣泡進(jìn)入并通過流通池的征兆。有些檢測器對空氣的存在也非常敏感，但表現(xiàn)出的征兆與UV/VIS不同，例如有報導(dǎo)說，當(dāng)使用熒光（FL）檢測器時，流動相中溶解氧的存在可能會使一些化合物失去熒光性。此外，對于利用待測物質(zhì)在電極表面發(fā)生氧化還原反應(yīng)引起電流變化而進(jìn)行檢測的電化學(xué)（EC）檢測器，對流動相中的溶解氧的存在也非常靈敏。此外，氣泡的存在有時還會導(dǎo)致保留時間不重現(xiàn)。
所以，必須注意消除流動相中的空氣，并且還應(yīng)避免空氣由管路（如PTFE管）滲透進(jìn)流動相中。如果適當(dāng)?shù)仃P(guān)注在使用之前脫去流動相中溶解進(jìn)的空氣，上述這些問題均能避免，或把影響降至低。常用的脫氣方法有如下幾種：
1. 吹氦脫氣法。利用氦氣在液體中溶解度比空氣低的特性，在0.1MPa壓力下，以約60 mL/min流速通入流動相儲液容器中10～15min，可以很有效地從流動相中排除溶解的空氣，能排除接近80%的氧氣。采用一個高效分布式噴射流裝置，一體積的氦氣可從流動相中將等體積的幾乎全部氣體排除。這意味著1L氦氣通過1L流動相就可完成排氣這個工作。這種脫氣方法雖然好，但我們國內(nèi)氦氣價格較高，很少有實驗室采用此方法。
2. 加熱回流法。此法的脫氣效果較好。在操作時要注意冷凝塔的冷卻效率，否則溶劑會丟失，混合流動相的比例會有變化。
3. 抽真空脫氣法。此法可使用真空泵，降壓至0.05～0.07MPa即可除去溶解的氣體。但是由于真空脫氣會使混合溶劑組成發(fā)生變化，從而影響到實驗的重現(xiàn)性，因此多用于單溶劑體系的簡單分析。
4. 超聲波脫氣法。將欲脫氣的流動相置于*中，用超聲波震蕩10～20min。此法的脫氣效果差。
5. 在線脫氣法。現(xiàn)在商品的HPLC儀器，均可配在線脫氣機(jī)。在線脫氣使用簡單，低故障，有效。建議購買儀器時一定要購買，有的公司是作為選購件，所以與儀器公司談配置時應(yīng)與公司確認(rèn)。
