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瑞氏染液使用方法

時(shí)間:2013/5/29閱讀:1626
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瑞氏染液使用方法:

瑞氏染料是由堿性染料美藍(lán)(Methvlem blue)和酸性染料黃色伊紅(Eostm Y)合稱伊紅美藍(lán)染料即瑞氏(美藍(lán)-伊紅Y)染料。
用甲醇作瑞氏染料溶劑,即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶劑,有兩種作用:
1)甲醇使瑞氏染料中美藍(lán)(M)與伊紅(E)在溶液中離解,可使細(xì)胞成分選擇性吸附其中的有色物質(zhì)而著色。
ME(瑞氏染料)----M+ + E-
在配制的瑞氏染液中美藍(lán)如放置過(guò)久即可氧化而含有天青,美藍(lán)天青與伊紅化合物能使核染成紫紅色,但不能使胞漿染為藍(lán)色,多余美藍(lán)就可以使胞漿染成藍(lán)色,染色主要是化學(xué)作用,是離子彼此結(jié)合的反應(yīng)。
2)甲醇具有強(qiáng)大的脫水力,可將細(xì)胞固定在一定形態(tài)及增加細(xì)胞結(jié)構(gòu)的表面積,提高細(xì)胞對(duì)染料吸收作用,同時(shí)由于甲醇吸附染色液中的水,使染色液升溫,加速染色反應(yīng)。
染液配制
一、瑞氏染液配制:
瑞氏染料 830gm1g
甲醇(AR 500ml600ml
1)先稱干燥(事先放入溫箱干燥過(guò)夜)瑞氏染料放置乳缽內(nèi),用乳棒輕輕敲碎染料成粉末,再行研磨至聽(tīng)不到研芝麻聲即呈細(xì)粉末,加少許甘油或甲醇溶解研磨,使染料在乳缸內(nèi)顯“一面鏡”光澤,而無(wú)染料粉粒沉著。
2)再加較多量甲醇研磨呈一面鏡光亮,靜置片刻,將上層液體倒入一清潔儲(chǔ)存瓶?jī)?nèi)(用甲醇空瓶),再加甲醇研磨,重復(fù)數(shù)次,至乳缽內(nèi)染料及甲醇用完為止,搖勻,密封瓶口。
3)存室溫暗處,儲(chǔ)存愈久,則染料溶解、分解就越好,一般儲(chǔ)存3個(gè)月以上為佳。
二、緩沖液作用:
1)染色對(duì)氫離子濃度是十分敏感的,據(jù)觀察pH值的改變,可使蛋白質(zhì)與染料形成的化合物重新離解。
2)緩沖液須保持一定的pH使染色穩(wěn)定,PBSpH 一般在6.4~6.8,
3)偏堿性染料可與緩沖液中酸基起中和作用,偏酸性染料則與緩沖液中的堿基起中和作用,使pH恒定。
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