（1）常規(guī) 4ktm石蠟切片貼在涂有切片黏合劑的干凈載玻片上，58℃烤18h，常規(guī)脫蠟至水，0．01mol／L（pH7．4）PBS洗3X3min。

（2）抗原修復 微波3檔（98℃）20min，室溫中自然冷卻20min，0．01mol／L（pH7．4）PBS洗3X 3min。

（3）滴加適當稀釋特異性一抗（如用P53一抗，可以1：5000～10000稀釋），4℃過夜，PBS洗3X3min。

（4）EnVisionTM試劑（HRP），37℃，30min，PBS洗3X3min。

（5）0．007mol／L*化酪胺酰胺（內(nèi)含0．003％Hz02），37℃，12min，PBS洗3X3min。

（6）鏈霉親和素—PE結(jié)合物1：100，37℃ ，40min，PBS洗3X3min。

（7）50％甘油TB（pH9．0）封片。

（8）熒光顯微鏡觀察。

如果熒光信號弱，還可以從第（4）步開始重復幾次，使陽性信號獲得明顯改善為止。

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