我們?cè)黾恿艘徊奖Wo(hù)酶標(biāo)板的程序。在10mM的磷酸鹽中加入適量的糖、無關(guān)蛋白質(zhì)、ELISA試劑盒*以及二價(jià)金屬離子,作為酶標(biāo)板保護(hù)劑,在封閉完后加入保護(hù)液于4℃冰箱中孵育過夜,同時(shí)與未做保護(hù)的酶標(biāo)板進(jìn)行對(duì)照,然后將保護(hù)的及未保護(hù)的酶標(biāo)板置于37烘箱中放置15天,考察保護(hù)液對(duì)酶標(biāo)板的穩(wěn)定性的影響。
不僅由于在凍干的過程中會(huì)影響酶標(biāo)抗體的活性,而且在臨床應(yīng)用中頗為不便。適當(dāng)?shù)木彌_液以及添加無關(guān)蛋白質(zhì)、糖、防腐劑以及一些含氨基的化合物等都會(huì)對(duì)對(duì)酶標(biāo)抗體的活性起一定的保護(hù)作用,因此我們?cè)O(shè)計(jì)了一組保護(hù)劑用于保護(hù)酶標(biāo)抗體,ELISA試劑盒與未添加任何糖蛋白的酶標(biāo)抗體做對(duì)照,將經(jīng)保護(hù)的酶標(biāo)抗體及未保護(hù)的酶標(biāo)抗體置于37℃烘箱中放置6天,考察保護(hù)液對(duì)酶標(biāo)抗體的影響。
包被抗原時(shí),為了得到*的包被效果,我們采用了碳酸鹽緩沖液(50mM ph9.6 )、磷酸鹽緩沖液(50mM ph7.6)、以及TRIS鹽酸緩沖液(50 mM ph7.6)三種緩沖液作為包被液,抗原包被濃度為5ug/ml,及2.5ug/ml,酶標(biāo)抗體工作濃度為1:400及1:300,用自動(dòng)酶標(biāo)儀分析,選擇*的包被緩沖液系統(tǒng)。同時(shí)為了保證緩沖液能夠長(zhǎng)期保存,我們?cè)诎灰褐刑砑恿?.01%的硫柳汞作為防腐劑。ELISA試劑盒酶標(biāo)板經(jīng)過封閉后在低溫下僅能存放2周左右,為了延長(zhǎng)固相酶標(biāo)板上抗原的穩(wěn)定性,