ELISA試劑盒的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記，根據(jù)酶反應底物顯色的深淺進行定性或定量分析。目前所報道的相關研究中，都未能對利用雙抗夾心ELISA方法檢測雙歧桿菌的反應前提進行建立并且沒有對雙歧桿菌進行定量檢測的研究。在所有以抗原抗體反應為基礎的檢測方法中，酶聯(lián)免疫吸附法是目前發(fā)展zui為迅速并且較為完善的檢測方法。近年來跟著免疫學的不斷發(fā)展以及血清學技術的應用，對雙歧桿菌的鑒定和檢測已從傳統(tǒng)的平板計數(shù)方法發(fā)展到應用以抗原抗體反應為基礎的各種酶免疫檢測方法。ELISA方法克服了傳統(tǒng)平板計數(shù)法的繁瑣及分子生物學檢測方法的用度昂貴等缺點，如能開發(fā)出其檢測雙歧桿菌的試劑盒將對實際應用將具有重要意義。因為利用了酶的率催化反應，間接放大了免疫反應的結(jié)果，使測定具有*的敏捷度。
具體研究結(jié)果如下:
1.制備出的兔抗長雙歧桿菌免疫血清效價可達1:20480;鼠抗長雙歧桿菌免疫血清效價達1:10240,均具有較高的效價。
2.通過對雙抗夾心ELISA檢測方法中各反應條件進行摸索和比較,確定*反應條件為：*包被抗體和二抗反應濃度分別為1:160和1:5120；選用NBS和1%BSA-PBS分別作為包被緩沖液和封閉緩沖液;封閉30min;酶標抗體作1:2000的稀釋之后作用90min;zui后底物反應時間為20min;并且繪制了此方法檢測雙歧桿菌的標準曲線，得出了標準曲線方程:y=0.4461x-2.1503,相關系數(shù)為R2=0.9881。
3. ELISA試劑盒的組裝要組分有:兔抗長雙歧桿菌免疫血清包被并封閉的8×12孔酶標板;工作濃度鼠抗長雙歧桿菌免疫血清;工作濃度酶標抗體;長雙歧桿菌標準品;底物溶液;終止液;濃縮洗滌液;操作方法及說明。
4.ELISA試劑盒的方法學評價對所組建的雙抗夾心ELISA檢測雙歧桿菌的試劑盒進行了方法學評價,包括:特異性、重復性、靈敏度。對分別含有4種不同雙歧桿菌和七種不含雙歧桿菌的樣品進行檢測,非雙歧桿菌屬微生物對檢測結(jié)果沒有影響,說明此方法具有較強的特異性;用五種不同樣品對板間及板內(nèi)分別做了重復性實驗,僅有很好的幾分樣品變異系數(shù)超過10%,說明此試劑盒具有良好的重復性;對雙歧桿菌的zui低檢出限為106cfu/mL;
5.ELISA試劑盒的保存期實驗通過對包被酶標板的保質(zhì)期進行測定,實驗證明,此試劑盒能在4℃的條件下保存一年以上;
6.采用所組建的雙歧桿菌雙抗夾心ELISA試劑盒對市售雙歧桿菌的酸奶、奶粉及自制雙歧桿菌乳粉進行檢測與平板計數(shù)法相比。