臨床測(cè)定技術(shù)的發(fā)展主要在于方法學(xué)的發(fā)展，而方法學(xué)的發(fā)展依托于小鼠ELISA試劑盒生產(chǎn)技術(shù)不斷進(jìn)步更新和新型標(biāo)記物的應(yīng)用。目前，分子生物學(xué)正在并zui終肯定會(huì)讓我們對(duì)整個(gè)生命科學(xué)有一個(gè)全面而*的認(rèn)識(shí)，其對(duì)免疫測(cè)定技術(shù)發(fā)展的影響也是直接而又有效的，它使我們對(duì)以前一些難以檢測(cè)的生物活性物質(zhì)的測(cè)定變得輕而易舉，并且大大提高了檢測(cè)的靈敏度和特異性。

1、基因工程試劑對(duì)免疫測(cè)定技術(shù)發(fā)展的影響

免疫測(cè)定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng)，所以任何的診斷試劑離不開的原料，如抗原抗體，酶等。以前用于免疫測(cè)定的抗原通常為各種純化抗原，而抗體則為純化抗原免疫動(dòng)物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體，而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過各種化學(xué)合成方法制備。近年來，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測(cè)定試劑幾成為現(xiàn)實(shí)的新一代試劑，各種新型使用的測(cè)定方法也不斷出現(xiàn)。

HBsAg試劑特點(diǎn)（檢測(cè)模式：臨床抗體夾心法）：

包被抗體為山羊多抗，多抗具有高親和性和對(duì)抗原各種表位的反應(yīng)性。

酶表抗體為與HBsAg有不同結(jié)合位點(diǎn)的鼠復(fù)合單位。

可測(cè)得HBsAg變異樣品。

提高檢測(cè)的特異性（99。98%）

提高檢測(cè)的靈敏度，應(yīng)用Parl  Ehrich 學(xué)說（PEI）HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品，對(duì)ad標(biāo)準(zhǔn)品的靈敏度為0。05nｇ/ml對(duì)ay標(biāo)準(zhǔn)品靈敏度為0。025ng/ml

2、基因工程

較早用于免疫測(cè)定的基因工程抗原是HBcAg和HBsAg，這兩種基因工程抗原的出現(xiàn)，較好地解決了抗HBc和HBe的測(cè)定問題。因?yàn)橐獜牟《颈旧砣ゴ罅揩@取這兩種純抗原較為困難，并且這一點(diǎn)對(duì)于難培養(yǎng)的病原微生物來說，如HIV、HCV和梅毒螺旋體等都有些共性。

2。1  HCV-Elisa試劑

HCV目前尚不能體外培養(yǎng)，只能用基因工程或化學(xué)合成方法獲取HCV結(jié)構(gòu)和非結(jié)構(gòu)區(qū)的各種抗原片斷，已知HCV基因組有7個(gè)功能區(qū)組成：核心、E1、E2/NS1 NS2 NS3 NS4 NS5（有分為NS和NS5b）區(qū)，合成抗原的優(yōu)點(diǎn)是易于純化，特異性好，抗原抗體反應(yīng)強(qiáng)。

2。1。1  *代抗HCV-小鼠ELISA試劑盒：

-由美國ortho公司克隆C1003抗原幾個(gè)片斷與人超氧化物歧化酶（SOD）結(jié)合。用酵母從病毒基因組非結(jié)合區(qū)得到表達(dá)，表達(dá)為融合蛋白，亦作為包被固相載體。

-抗原組合：NS4 區(qū)二個(gè)基因片斷為NS 5-1-1和C1003

-特性：IgG抗C100在發(fā)病后數(shù)月后，才檢出，故不宜作早期診斷。

-約由20%的病人不出現(xiàn)抗體。IgM抗-C100急性期檢出率只有64%。

-C100的抗原性較弱，在HCV復(fù)制中，不能充分暴露宿主的免疫系統(tǒng)。

-特異性和靈敏性較差。

2。1。2  第二代HCV-小鼠ELISA試劑盒

-用基因重組的HCV結(jié)構(gòu)蛋白與非結(jié)構(gòu)蛋白抗原包被固相載體。

-抗原組合：核心區(qū)（C區(qū)）多肽C22  NS區(qū)多肽C33  C1003和NS 5-1-1

-增加C22區(qū)和C33區(qū)后，抗體出現(xiàn)早，有助早期診斷，提高陽性率。有利早期診斷。