小鼠精母細胞胞5×10^5以上/1ml
對于大多數(shù)細胞研究工作者來說，小鼠精母細胞污染那可是個糟糕的事情，也是比較容易出現(xiàn)的情況，我們?nèi)绾畏婪?，如何避免，是我們要學習和掌握的。
SP6/T7 Transkription Kit 1 kit （2 x 20 transcription reactions）
Genopure Plasmid Midi Kit 1 kit （for up to 20 preparations）
PCR Optimization Kit 1 kit
High Pure PCR Cleanup Micro Ki 1 kit （up to 50 purifications）
RNA-Lenght-standards II DIG 2 2 µg （200 µl）
RNA Mol.Weight Marker III, DIG 2 µg （200 µl）
Liberase TL Research Grade 10 10 mg 
 下面我們對細胞培養(yǎng)中常見的污染情況，做個總結(jié)：
1）原蟲：培養(yǎng)液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細小的點狀物數(shù)量非常多，輕微活動，細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢，而且細胞狀態(tài)不好，邊緣不清楚，細胞不透亮。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養(yǎng)。這種共生是非常普遍的，但他們的數(shù)量小，細胞站優(yōu)勢所以不會影響到細胞的正常生長，只有當他們到達一定的數(shù)量時就會影響到細胞的生長，zui終形成惡性循環(huán)。
2）霉菌：培養(yǎng)液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質(zhì)，37度孵箱培養(yǎng)2-3天，仍清亮，但出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細胞仍可生長，但時間長之后，細胞的活力狀態(tài)變差，用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內(nèi)，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅?；蛘咴谂囵B(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒*高鹽液體,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有細胞暫時轉(zhuǎn)移，采用過氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把過氧乙酸放置在孵箱內(nèi)一個小時，使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后，再移入細胞。孵箱應(yīng)定期清潔（2月左右），尤其在多雨的季節(jié)。其它培養(yǎng)箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外燈照。預(yù)防霉菌污染，可在培養(yǎng)基里加3u/ml的兩性霉素或*或*或雙抗；但細胞一旦污染，很難挽救，*或*或雙抗都于事無補，建議舍棄該污染細胞。，將環(huán)境*消毒，如果所有細胞都污染，可能是系統(tǒng)污染，檢查一下培養(yǎng)基和器材，如果只是個別污染，可能是操作問題，就要注意操作。
3）細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據(jù)感染細菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃，對細胞生長影響明顯。仔細檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時放氣時間足夠，壓力足夠！尤其是和儲存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象！ 可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理
4）黑蛟蟲：可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養(yǎng)液也是不渾的，一般不會太影響，細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態(tài)良好，且觀測到的運動物無明顯增多，且培養(yǎng)液顏色、透明度無明顯變化，可在同一批號的血清養(yǎng)的細胞中發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象。對細胞生長狀態(tài)不會有明顯影響，在細胞增殖旺盛之后會自然消失，除更換血清外無須特殊處理。建議如果細胞有可能是此種污染的話，可以增加細胞的種板密度，以提高細胞的生存率。
5）真菌：一般培養(yǎng)液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開始很像死細胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細胞碎片分不清，慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢，不象細菌那么容易被發(fā)現(xiàn)，但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細胞就被污染了，也很難救活了。
6）支原體：黑色的，好象多為多形，培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會渾濁，原體感染，國內(nèi)血清很多都沒有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中zui常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以后，細胞病變不很明顯，只是慢慢死去。用泰樂菌素，獸用支原體病的藥，但可用于細胞培養(yǎng)，無任何不良反應(yīng)。Sigma公司的使用時用50ug/ml Tylosin培養(yǎng)液培養(yǎng)6天或連續(xù)傳兩代即可清除支原體污染。如果作為常用的抗生素的話, 建議用8ug/ml的濃度。
污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒問題、操作問題、環(huán)境問題等等關(guān)于培養(yǎng)基的無菌狀況，取培養(yǎng)基至培養(yǎng)瓶中（不加細胞），37度試培養(yǎng)一段時間后觀察。如果沒有細菌生長就是操作的問題。 也可以在培養(yǎng)基中事先加入雙抗（*和氨芐*）。但雙抗有時會影響細胞的狀態(tài)，所以在做轉(zhuǎn)染、檢測細胞某項指標前一定要撤去雙抗，以避免影響實驗結(jié)果。1、孵箱應(yīng)定期用三氧機消毒或者 紫外光照射，并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時孵箱內(nèi)的水應(yīng)是三蒸水2、超凈臺\取材\器材\培養(yǎng)液\培養(yǎng)瓶\操作等因素3、超凈臺的風機不能過大，風機到6-8格。否則也可能能致霉菌污染4、無菌室經(jīng)甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的氨水噴灑中和，約幾小時即可進入操作。
DIG Labeled Control DNA 50ul 50 µl
DIG Labeled Control RNA 50ul 50 µl
DNA MW-Marker XV 50 µg （1 A260 unit）
FuGENE 6 Transfection Reagent 10 ml （up to 3,000 transfections）
High Pure 96 UF Cleanup Plates 1 pack （10 x 96 purifications）
PCR Fluorescein Labeling Mix 100 µl （10 PCRs for 100 µl each）
FuGENE HD Transfection Reagent 1.0 ml （up to 300 transfections）
Taq DNA Polym., 5 units/Ál （20 5,000 U （20 x 250 U）
DNA MW Marker VIII, Digoxigeni 5 µg （500 µl）
AttoPhos Substrat Set 1 set （for 1,800 wells or 720 tubes）
DNA Isolation Kit for Cells an 1 kit （10 isolations of 400 mg each for tissue or 5 x 107cultured cells）
Histone H1 5 mg
Taq DNA Polymerase, 1unit/Ál （ 250 U
FastStart SYBR Green Master RO 5 ml （4 x 1.25 ml） （for 200 reactions of 50 µl final reaction volume）
FuGENE HD Trans Rgt Mega-pack 5 x 1 ml （up to 1,500 transfections）
DNA-binding Protein Purificati 1 kit
DNA Mol-weight Marker VI, Digo 5 µg （500 µl）
dATP 250 µl （25 µmol）
dCTP 250 µl （25 µmol）
2'-Deoxy-guanosine-5'-TP Solut 250 µl （25 µmol）
dTTP, 25 Ámol 250 µl （25 µmol）
dUTP, 25 Ámol 250 µl （25 µmol）
Fluorescein High Prime 100ul 100 µl （25 reactions）
Desoxy-NTP Set, slt. 40 x 10 µmol （40 x 100 µl）
PCR Core Kit^PLUS 1 kit （for 50 reactions of 50 µl final reaction volume）
FuGENE HD Transfection Reagent 10 ml （up to 3,000 transfections）
Genopure Plasmid Maxi Kit 1 kit （for up to 10 preparations）
Homogen.Caspases Assay, fluori 1 kit （100 tests on 96-well plates, 400 tests on 384-well plates）
High Pure PCR Cleanup Micro Ki 1 kit （up to 200 purifications）
Homogen.Caspases Assay,fluorim 1 kit （1,000 tests on 96-well plates, 4,000 tests on 384-well plates）