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在宿主細(xì)胞過量的情況下，噬斑的數(shù)量隨著噬菌體的增加呈線性增加。由于這個(gè)原因，在感染以前，要將噬菌體進(jìn)行稀釋，而不是將宿主細(xì)胞稀釋。以低MOI(感染重復(fù)性)鋪板，也可確保每一個(gè)噬斑僅包含一個(gè)DNA 

序列。

噬菌體滴度材料和試劑：

1. 微波爐

2. LB/IPTG/Xgal培養(yǎng) 板

3. lb培養(yǎng)基

4. 頂層瓊脂糖凝膠

噬菌體滴度操作步驟：

1. 在5~10ml LB培養(yǎng)基中接種單個(gè)ER2537克隆，振搖孵育直至對數(shù)生長中期(OD600~0.5)

2. 在細(xì)胞生長時(shí)，微波融化頂層瓊脂糖凝膠，分裝至無菌培養(yǎng)管內(nèi)，每管3ml。維持在45℃?zhèn)溆谩?/span>

3. 37℃預(yù)熱LB/IPTG/Xgal培養(yǎng)板，備用。

4. 以LB培養(yǎng)基10倍比稀釋噬菌體。

建議稀釋范圍：對擴(kuò)增的噬菌體培養(yǎng)上清，108-1011;對未擴(kuò)增的篩選洗脫液，101-104。每次稀釋都換用新的加樣槍頭，使用氣溶膠阻隔槍頭以避免交叉污染。

5. 一旦ER2537培養(yǎng)物長至對數(shù)生長中期，分裝至微量離心管中，每管200ml。

6. 將倍比稀釋的噬菌體上清加入含細(xì)菌培養(yǎng)物的微量離心管中，一支微量離心管中僅加入一種稀釋液10ml，快速渦旋，室溫孵育1-5min。

7. 轉(zhuǎn)移至含有45℃頂層瓊脂糖凝膠的管中，快速渦旋混勻，立即傾倒至預(yù)熱的LB/IPTG/Xgal平板上，輕緩搖動平板使頂層膠均勻分布。

8. 冷卻平板5min，37℃倒置培養(yǎng)過夜。

9. 噬斑計(jì)數(shù)以噬斑數(shù)為100左右的平皿為準(zhǔn)，噬斑數(shù)乘以稀釋度即可獲得每10ml噬菌體的滴度-噬斑形成單位(pfu)。