蛋白質(zhì)是生命活動的執(zhí)行者，細(xì)胞內(nèi)的生理變化都是通過蛋白質(zhì)來實(shí)現(xiàn)的。但是生命活動中各項功能和行為不是由單一的蛋白質(zhì)來完成的，需要蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)與核酸之間的相互作用來實(shí)現(xiàn)的。蛋白-蛋白互作網(wǎng)絡(luò)與轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)對調(diào)控細(xì)胞及其信號有重要意義。于是對于蛋白之間相互作用的研究也變的很重要，關(guān)于研究方法也是層出不窮。

一、原理：

酵母雙雜交系統(tǒng)由Fields和Song等首先在研究真核基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控中建立的。酵母的半乳糖苷酶基因的轉(zhuǎn)錄激活因子GL4有兩個獨(dú)立的結(jié)構(gòu)域 ：N末端的DNA結(jié)合域（BD）和C末端的轉(zhuǎn)錄激活域（AD）。BD與DNA分子結(jié)合，AD激活下游基因的轉(zhuǎn)錄，只有兩者在空間上充分接近才能激活下游基因的轉(zhuǎn)錄。于是將要研究的兩個蛋白分別與BD和AD融合，如果兩個蛋白有相互作用則AD和BD在空間上會接近進(jìn)而激活下游報告基因的轉(zhuǎn)錄。

二、操作步驟：

（1）首先構(gòu)建已知蛋白的cDNA序列為誘餌，與DNA結(jié)合域融合

（2）將待篩選的蛋白的cDNA序列與轉(zhuǎn)錄激活域融合，構(gòu)建成文庫質(zhì)粒

（3）將這兩個質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化到酵母細(xì)胞中

（4）通過檢測下游報告基因的表達(dá)篩選或確認(rèn)蛋白相互作用。

三、優(yōu)缺點(diǎn)：

優(yōu)點(diǎn)：是可以在文庫中可以高通量篩選與目的蛋白相互作用的蛋白。

缺點(diǎn)：是假陽性多，還需要其他方法相互印證，不適用于所有的蛋白。