滬鼎生物分享胎牛血清使用中的常見問題及解決方案

一、如何儲(chǔ)存和解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損？
   胎牛血清因?yàn)槠洚a(chǎn)品的特性，在儲(chǔ)存的時(shí)候需要多加注意，錯(cuò)誤的操作會(huì)使胎牛血清失去活性，在實(shí)際應(yīng)用的時(shí)候應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：

   在解凍和儲(chǔ)存的時(shí)候應(yīng)該將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在2－8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲(chǔ)存血清，并避免反復(fù)凍融。我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí)，請(qǐng)勿超過一個(gè)月。若一次無(wú)法用完一瓶，建議無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。

                                 
二、血清中包含絮狀沉淀該怎么處理？
   血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后，也會(huì)存在于血清中，亦是造成沉淀物的原因之一。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質(zhì)量。

   若欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。不使用過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞過濾膜。 

三、如何避免血清中產(chǎn)生沉淀？按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生：
1、解凍胎牛血清時(shí)，請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫)，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。 

2、解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。

3、請(qǐng)勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。 

4、勿將血清置于37℃太久，否則血清會(huì)變得渾濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因此受到破
壞，從而影響血清的品質(zhì)。

5、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無(wú)須做此步驟。 

6、若必須做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高，時(shí)間過久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多。 

四、培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長(zhǎng)期保存嗎？
   一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí)，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因?yàn)橐恍┛股睾脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_始降解。

五、為什么要熱滅活血清？
   加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué) 研究，培養(yǎng)es細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。

六、細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點(diǎn)是污染嗎？如何處理？
   一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài)，黑點(diǎn)是否游動(dòng)。如果細(xì)胞被污染，微生物則會(huì)大量繁殖，培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。

   如果在鏡下觀察細(xì)胞，生長(zhǎng)狀態(tài)良好，與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比，沒有任何變化，那么，黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)：
1、細(xì)胞生長(zhǎng)過老，破碎的細(xì)胞殘骸；
2、血清質(zhì)量不好，反復(fù)凍融的結(jié)果；
3、配制培養(yǎng)基的ph值偏高，不宜細(xì)胞生長(zhǎng)；
4、配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格?？蓱?yīng)用離心、過濾的方法去除這些黑點(diǎn)；
5、培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn)，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除。

七、細(xì)胞培養(yǎng)中如何防止黑點(diǎn)？
1、盡可能地減少血清凍融次數(shù)。
2、培養(yǎng)基無(wú)需37℃水浴。
3、培養(yǎng)基保持ph值7.0- 7.2。
4、嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì)，容器定期刷洗。
5、掌握細(xì)胞傳代的時(shí)機(jī)，細(xì)胞切勿生長(zhǎng)過老。

八、血清保存和使用須注意：
   血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超過一個(gè)月。解凍血清時(shí)?，應(yīng)先將血清至于2-8℃冰箱，并經(jīng)常搖勻使之溶解，然后至室溫放置使之升溫，不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中，如放在37℃解凍，顏色加深，粘稠度也會(huì)增加，血清在解凍和熱滅活后，應(yīng)按用量分裝并于-20℃保存，避免反復(fù)凍融。

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