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可能有不少朋友都知道“選擇困難戶”這么一說(shuō),而在抗體實(shí)驗(yàn)中的選擇也難倒了很多老 師,在面對(duì)選擇抗體的時(shí)候是否也讓您糾結(jié)了很長(zhǎng)時(shí)間呢?上海滬鼎生物發(fā)現(xiàn)可通過(guò)樣品性質(zhì) 選擇抗體。
樣品的性質(zhì)
1. 希望檢測(cè)的蛋白質(zhì)區(qū)域
在免疫原物質(zhì)刺激下宿主動(dòng)物發(fā)生免疫反應(yīng),產(chǎn)生抗體。免疫原物質(zhì)種類繁多,包括全長(zhǎng) 蛋白、蛋白質(zhì)片段、多肽、整個(gè)生物體或細(xì)胞。免疫原通常在數(shù)據(jù)表上有所描述(但有些情況 因?qū)i原因無(wú)法提供對(duì)免疫原的確切描述)。如果打算檢測(cè)蛋白質(zhì)片段或者全長(zhǎng)蛋白的特定異 形體或區(qū)域,需要確保所選抗體是用與該片段或區(qū)域相同的免疫原制備的或者是用包含于該片 段或區(qū)域內(nèi)的免疫原制備的。如果打算通過(guò)FACS檢測(cè)活細(xì)胞上的細(xì)胞表面蛋白,需要選擇由蛋 白的胞外域制備的抗體。
2. 樣品的處理
有些抗體要求樣品用特定方式處理。例如,許多抗體僅能識(shí)別已還原和變性的蛋白質(zhì),可 能是因?yàn)檫@樣露出了蛋白質(zhì)折疊形成的二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)中隱藏起來(lái)的表位。另一方面,有些抗 體僅能識(shí)別天然、折疊狀態(tài)的蛋白質(zhì)上的表位。(對(duì)于要用于蛋白質(zhì)印跡的Abcam抗體,除非在 數(shù)據(jù)表上另有說(shuō)明,否則應(yīng)使樣品還原和變性)。當(dāng)搜索用于免疫組織化學(xué)的抗體時(shí),應(yīng)注意 有些抗體僅適用于未固定的冷凍組織,并且如果沒(méi)有抗原修復(fù)步驟,逆轉(zhuǎn)福爾馬林固定所引起 的交聯(lián),那么許多其它抗體也不能與福爾馬林固定、石蠟包埋的組織中的靶標(biāo)結(jié)合。這些使用 上的限制會(huì)在數(shù)據(jù)表的應(yīng)用章節(jié)中加以說(shuō)明。
樣品的物種
所選抗體的抗原物種應(yīng)與所研究的物種相同。但抗體可與來(lái)自其它物種的具有氨基酸序列 高度同源性的相同靶蛋白反應(yīng)。如果樣品不是來(lái)自列出的物種之一,這并非意味著抗體不能檢 測(cè)該蛋白質(zhì),而是因?yàn)槲锓N尚未經(jīng)過(guò)測(cè)試,我們難以評(píng)價(jià)其適用性。可根據(jù)序列相似性對(duì)交叉 反應(yīng)性進(jìn)行預(yù)測(cè):值得驕傲的是,Abcam在數(shù)據(jù)表上提供Expasy和NCBI BLAST鏈接,從而可比較 不同物種間的氨基酸序列同源性。
樣品性質(zhì)是*選擇抗體方法,具體表現(xiàn)內(nèi)容已經(jīng)在上面細(xì)細(xì)的介紹了一番,如果您不太 明白或者新的產(chǎn)品問(wèn)題咨詢,您都可以來(lái)電給我公司,我們有專業(yè)的技術(shù)專員,在一個(gè)工作日 內(nèi)給您相應(yīng)的解決方案。
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