為了得到更好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，一些ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)新手們還需多加了解技術(shù)內(nèi)容，公司每周都會為您精心整理出重點(diǎn)技術(shù)要領(lǐng)，能夠熟練的掌握好這些之后再應(yīng)用到實(shí)驗(yàn)里面就會簡單的多。今天的主要內(nèi)容是入了ELISA的門，這些技術(shù)點(diǎn)你得知道。

樣本加樣方法

1、細(xì)胞上清：前處理必須是細(xì)胞離心去除，每孔直接加100μl即可。如果濃度太高需稀釋時，用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液直接稀釋。

2、腦脊液：前處理必須是細(xì)胞離心去除，每孔直接加100μl即可。如果濃度太高需稀釋時，用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液直接稀釋。

3、血清血漿：請加入50ul樣本分析緩沖液后加50ul標(biāo)本,如稀釋量大，請將樣本與樣本分析緩沖液等量加入，不足部分用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)充至100ul。

A.血清標(biāo)本應(yīng)是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；

B.血漿標(biāo)本，推薦用EDTA的方法收集若待測樣本不能及時檢測，標(biāo)本收集后請分裝，凍存于－20℃，避免反復(fù)凍融。

C.血清標(biāo)本不應(yīng)添加任何防腐劑或抗凝劑；

D.標(biāo)本應(yīng)清澈透明，檢測前樣本中如有懸浮物應(yīng)通過離心去除。

E.請勿使用溶血，高血脂或污染的標(biāo)本檢測，否則結(jié)果將不準(zhǔn)確。

4、組織勻漿液的樣本，要制備過程中需要在緩沖液中加入蛋白酶抑制劑，防止蛋白成份被內(nèi)源性蛋白酶降解，造成檢測結(jié)果的值偏低。

因組織勻漿液的樣本蛋白種類多，含量豐富，實(shí)驗(yàn)參照血清血漿標(biāo)本的處理方法進(jìn)行，否則就會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。具體是加入50ul樣本分析緩沖液后加50ul標(biāo)本，需稀釋時，請將樣本與樣本分析緩沖液等量加入，不足部分用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)充至100ul。

因?yàn)槟繕?biāo)蛋白不同，可能造成降解的蛋白類型可能不一樣，如果實(shí)驗(yàn)前通過文獻(xiàn)確定用哪種蛋白酶抑制劑，有針對性加入，可節(jié)省抑制劑。如果查不到相關(guān)文獻(xiàn)，可采用組合抑制的辦法確保蛋白不易被降解。