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間接法和夾心法ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果定性判斷測(cè)定

時(shí)間:2019/4/4閱讀:1430
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   定性測(cè)定的結(jié)果判斷是對(duì)受檢標(biāo)本中是否含有待測(cè)抗原或抗體作出"有"或"無(wú)"的簡(jiǎn)單回答,分別用"陽(yáng)性"、"陰性"表示。"陽(yáng)性"表示該標(biāo)本在該測(cè)定系統(tǒng)中有反應(yīng)。"陰性"則為無(wú)反應(yīng)。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果,即用滴度來表示反應(yīng)的強(qiáng)度,其實(shí)質(zhì)仍是一個(gè)定性試驗(yàn)。在這種半定量測(cè)定中,將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗(yàn),呈陽(yáng)性反應(yīng)的zui高稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低,可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱,這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強(qiáng)陽(yáng)性、弱陽(yáng)性更具定量意義。
夾心法ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果定性判斷測(cè)定
a.陽(yáng)性判定值
陽(yáng)性判定值(cut-off value)一般為陰性對(duì)照A值加上一個(gè)特定的常數(shù),以此作為判斷結(jié)果陽(yáng)性或陰性的標(biāo)準(zhǔn)。
用此法判斷結(jié)果要求實(shí)驗(yàn)條件十分恒定,試劑的制備必須標(biāo)準(zhǔn)化,陽(yáng)性和陰性的對(duì)照品應(yīng)符合一定的規(guī)格,須配用精密的儀器,并嚴(yán)格按規(guī)定操作。陽(yáng)性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中通過對(duì)大量標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)檢測(cè)而得到的?,F(xiàn)舉某種檢測(cè)HBsAg的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對(duì)照品為不含HBsAg的復(fù)鈣人血漿,陽(yáng)性對(duì)照品HBsAg的含量標(biāo)明為P=9±2ng/ml。每次試驗(yàn)設(shè)2個(gè)陽(yáng)性對(duì)照和3個(gè)陰性對(duì)照。測(cè)得A值后,先計(jì)算陰性對(duì)照A值的平均數(shù)(NC X )和陽(yáng)性對(duì)照A值的平均數(shù)(PCX),兩個(gè)平均數(shù)的差(P-N)必須大于一個(gè)特定的數(shù)值(例0.400),試驗(yàn)才有效。3個(gè)陰性對(duì)照A值均應(yīng)≥0.5×NCX,并≤1.5×NCX,如其中之一超出此范圍,則棄去,而以另兩個(gè)陰性對(duì)照重新計(jì)算NCX;如有兩個(gè)陰性對(duì)照A值超出以上范圍,則該次實(shí)驗(yàn)無(wú)效。陽(yáng)性判定值按下式計(jì)算:
陽(yáng)性判定值=NCX+0.05
標(biāo)本A值>陽(yáng)性判定值的為陽(yáng)性,小于陽(yáng)性判定值的為陰性。應(yīng)注意的是,式中0.05為該試劑盒的常數(shù),只適合于該特定條件下,而不是對(duì)各種試劑均可通用。
根據(jù)以上敘述可以看出,在這種方法中陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照也起到試驗(yàn)的質(zhì)控作用,試劑變質(zhì)和操作不當(dāng)均會(huì)產(chǎn)生"試驗(yàn)無(wú)效"的后果。
b.標(biāo)本/陰性對(duì)照比值
在實(shí)驗(yàn)條件(包括試劑)較難保證恒定的情況下,這種判斷法較為合適。在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的A值后,計(jì)算S/N值。也有寫作P/N的,這里的P不代表陽(yáng)性(positive),而是病人(patient)的縮寫,不應(yīng)誤解。為避免混淆,更宜用S/N表示。在早期的間接法ELISA中,有些作者定出S/N為陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn),現(xiàn)多為各種測(cè)定所沿用。實(shí)際上每一測(cè)定系統(tǒng)應(yīng)該用實(shí)驗(yàn)求出各自的S/N的閾值。更應(yīng)注意的是,N所代表的陰性對(duì)照是不含受檢物質(zhì)的人血清。
 

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