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為了研究抗體的理化性質(zhì)、分子結(jié)構(gòu)與功能,以及應(yīng)用抗體于臨床疾病的診斷、治療及預(yù)防都需要人工制備抗體。目前,根據(jù)制備的原理和方法可分為多克隆抗體、單克隆抗體及基因工程抗體三類。
一、多克隆抗體
大多數(shù)抗原是由大分子 蛋白質(zhì)組 成,但只是抗原上有限部位的特殊分子結(jié)構(gòu)能與其相應(yīng)抗體結(jié)合,稱此部位為抗原決定簇(antigenic determinant)或表位(epitope)。
一種天然抗原性物質(zhì)(如細(xì)菌或其分泌的外毒素以及各種組織成分等)往往具有多種不同的抗原決定簇,而每一決定簇都可刺激機(jī)體一種抗體形成細(xì)胞產(chǎn)生一種特異性抗體。
在機(jī)體淋巴組織內(nèi)可存在千百種抗體形成細(xì)胞(即B細(xì)胞),每種抗體形成細(xì)胞只識別其相應(yīng)的抗原決定簇,當(dāng)受抗原刺激后可增殖分化為一種細(xì)胞群,這種由單一細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群體可稱之為細(xì)胞克?。╟lone)。同一克隆的細(xì)胞可合成和分泌在理化性質(zhì)、分子結(jié)構(gòu)、遺傳標(biāo)記以及生物學(xué)特性等方面都是*相同的均一性抗體,亦可稱之為單克隆抗體。
在早期傳統(tǒng)的抗體制備方法是將一種天然抗原經(jīng)各種途徑免疫動物,由于抗原性物質(zhì)具有多種抗原決定簇,故可刺激產(chǎn)生多種抗體形成細(xì)胞克隆,合成和分泌抗各種決定簇抗體分泌到血清或體液中,故在其血清中實際上是含多種抗體的混合物,稱這種用體內(nèi)免疫法所獲得的免疫血清為多克隆抗體,也是第一代抗體。由于這種抗體是不均一的,無論是對抗體分子結(jié)構(gòu)與功能的研究或是臨床應(yīng)用都受到很大限制,因此如何能獲得均一性抗體成為關(guān)注的問題。
二、單克隆抗體
體內(nèi)免疫法很難獲得單克隆抗體(monoclonal antibody,McAb)。如能將所需要的抗體形成細(xì)胞選出并能在體外進(jìn)行培養(yǎng)即可獲得已知特異的單克隆抗體。1975年德國學(xué)者Kohler和英國學(xué)者M(jìn)ilstein將小鼠骨髓瘤細(xì)胞和經(jīng)綿羊紅細(xì)胞(sheep rue blood cell),SRBC)免疫的小鼠脾細(xì)胞在體外進(jìn)行兩種細(xì)胞融合,結(jié)果發(fā)現(xiàn)部分形成的雜交細(xì)胞既能繼續(xù)在體外培養(yǎng)條件下生長繁殖又能分泌抗SRBC抗體,稱這種雜交細(xì)胞系為雜交瘤(hybridoma)。這種雜交瘤細(xì)胞既具有骨髓瘤細(xì)胞能大量無限生長繁殖的特性,又具有抗體形成細(xì)胞合成和分泌抗體的能力。它們是由識別一種抗原決定簇的細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的均一性抗體,故稱之為單克隆抗體。應(yīng)用雜交瘤技術(shù)可獲得幾乎所有抗原的單克隆抗體,只要這種抗原能引起小鼠的抗體應(yīng)答。
這種用雜交瘤技術(shù)制備的單克隆抗體可視為第二代抗體。
單克隆抗體由于純度高、特異性強(qiáng)、可以提高各種血清學(xué)方法檢測抗原的敏感性及特異性,但單克隆抗體多為雙價抗體,與抗原結(jié)合不易交聯(lián)為大分子集團(tuán),故不易出現(xiàn)沉淀反應(yīng)。單克隆抗體的應(yīng)用大促進(jìn)了對各種傳染病和惡性腫瘤診斷的準(zhǔn)確性。
單克隆抗體亦可與核素、各種毒素(如白喉外毒素或篦麻毒素)或藥物通過化學(xué)偶聯(lián)或基因重組制備成導(dǎo)向藥物(targetting drug)用于腫瘤的治療,是一種新型免疫治療方法,有可能提高對腫瘤的療效。
單克隆抗體亦可用于對各種免疫細(xì)胞及其它組織細(xì)胞表面分子的檢測,這對免疫細(xì)胞的分離、鑒定及分類及研究各種膜表面分子的結(jié)構(gòu)與功能都具有重要意義。
三、基因工程抗體
自1975年單克隆抗體雜交瘤技術(shù)問世以來,單克隆體在醫(yī)學(xué)中被廣泛地應(yīng)用于痢疾的診斷及治療。但目前絕大數(shù)單克隆抗體是鼠源的,臨床重復(fù)給藥時體內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體,使臨床療效減弱或消失。因此,臨床應(yīng)用理想的單克隆抗體應(yīng)是人源的,但人-人雜交瘤技術(shù)目前尚未突破,即使研制成功,也還存在人-人雜交瘤體外傳代不穩(wěn)定,抗體親合力低及產(chǎn)量不高等問題。目前較好的解決辦未能是研制基因工程抗體,(genetically engineering antibody)以代替鼠源單克隆抗體用于臨床。
基因工程抗體興起于80年代早期。這一技術(shù)是將對Ig基因結(jié)構(gòu)與功能的了解與DNA重組技術(shù)相結(jié)合,根據(jù)研究者的意圖在基因水平對Ig分子進(jìn)行切割、拼接或修飾,甚至是人工全合后導(dǎo)入受體細(xì)胞表達(dá),產(chǎn)生新型抗體,也稱為第三代抗體。
基因工程抗體包括嵌合抗體、重構(gòu)抗體、單鏈抗體、單區(qū)抗體及抗體庫等。其中以嵌合抗體研究的較多,也較成熟。單鏈抗體及單區(qū)抗體雖具有結(jié)構(gòu)簡單、分子小等優(yōu)點(diǎn)但其臨床應(yīng)用的前景尚待證實。
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