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上海滬鼎介紹:人促甲狀腺素釋放激素ELISA試劑盒操作實(shí)驗(yàn)原理

時(shí)間:2013/3/6閱讀:1717
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人促甲狀腺素釋放激素(TRH)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理:
人促甲狀腺素釋放激素(TRH)ELISA試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人促甲狀腺素釋放激素(TRH)水平。用純化的人促甲狀腺素釋放激素(TRH)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入促甲狀腺素釋放激素(TRH),再與HRP標(biāo)記的促甲狀腺素釋放激素(TRH)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的促甲狀腺素釋放激素(TRH)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人促甲狀腺素釋放激素(TRH)水平。

ELISA試劑盒優(yōu)勢(shì):
     1、、靈敏、特異的抗體
     2、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性
     3、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體
     4、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型
     5、種屬齊全:人(Human)、大鼠(Rat)、小鼠(Mouse)、猴(Monkey)、兔(Rabbit)、豬   (Pig)、馬(Horse)、魚(yú)、雞、鴨、羊等等
      6、可檢測(cè)指標(biāo)齊全:細(xì)胞因子檢測(cè)、心肌梗塞檢測(cè)、內(nèi)分泌檢測(cè)、肝纖維化檢測(cè)、自身免疫檢測(cè)、腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)、傳染病檢測(cè)、特種蛋白檢測(cè)、優(yōu)生優(yōu)育檢測(cè)等等。 

人促甲狀腺素釋放激素(TRH)ELISA試劑盒操作步驟:
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180U/mL, 120U/mL , 60U/mL, 30U/mL,15 U/mL)
2. 加樣:分別設(shè)空白孔空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37溫育30分鐘。
4. 配液:將30(48T20倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T20倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD。 測(cè)定應(yīng)
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