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181次 單克隆抗體的鑒定
對制備的McAb進行系統(tǒng)的鑒定是十分必要的,應(yīng)做下述幾個方面的鑒定:
1.抗體特異性的鑒定
除用免疫原(抗原)進行抗體的檢測外,還應(yīng)該用與其抗原成分相關(guān)的其它抗原進行交叉試驗,方法可用ELISA、IFA法。例如:①制備抗黑色素瘤細胞的McAb,除用黑色素瘤細胞反應(yīng)外,還應(yīng)該用其它臟器的腫瘤細胞和正常細胞進行交叉反應(yīng),以便挑選腫瘤特異性或腫瘤相關(guān)抗原的單克隆抗體。②制備抗重組的細胞因子的單克隆抗體,應(yīng)首先考慮是否與表達菌株的蛋白有交叉反應(yīng),其次是與其它細胞因子間有無交叉。
2.McAb的Ig類與亞類的鑒定
一般在用酶標或熒光素標記的第二抗體進行篩選時已經(jīng)基本上確定了抗體的Ig類型。如果用的是酶標或熒光素標記的兔抗鼠IgG或IgM,則檢測出來的抗體一般是IgG類或IgM類。至于亞類則需要用標準抗亞類血清系統(tǒng)作雙擴或夾心ELISA來確定。在作雙擴試驗時,如加入適量的PEG(3%),更有利于沉淀線的形成。
3.McAb中和活性的鑒定
用動物或細胞的保護實驗來確定McAb的生物學活性。例如,如果確定抗病毒McAb的中和活性,則可用抗體和病毒同時接種于易感的動物或敏感的細胞,來觀察動物或細胞是否得到抗體的保護。
4.McAb識別抗原表位的鑒定
用競爭結(jié)合試驗,測相加指數(shù)的方法,測定McAb所識別抗原位點,來確定McAb的識別的表位是否相同。
5.McAb親合力的鑒定
用ELISA或RIA競爭結(jié)合試驗來確定McAb與相應(yīng)抗原結(jié)合的親合力。
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