仙子益真膠囊對(duì)卵巢早衰小鼠外周血清性激素水平的影響

黃晉琰，林夏靜，徐    珉 *

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院婦科，廣東 廣州 510120）

摘要〕 目的  觀察補(bǔ)腎填精中藥仙子益真膠囊對(duì)卵巢早衰（premature  ovarian  failure，POF）模型小鼠性激素調(diào)節(jié)作用，初步探討仙子益真膠囊治療卵巢早衰的可能機(jī)制。 方法 選用動(dòng)情周期規(guī)律的 SPF 級(jí)雌性 C57BL/6J 性小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、造模組。造模組使用雷公藤多苷片造模成功后，再隨機(jī)分為模型組，益真低、中、高劑量組和西藥組，并予以相應(yīng)干預(yù)。 治療結(jié)束后 ELISA 測(cè)定血清中雌二醇（estradiol，E2）、卵泡刺激素（follicle-stimulating  hormone，F(xiàn)SH）及黃體素（luteinizing  hormone，LH）的含量。 結(jié)果與空白對(duì)照組比較，模型組 E2 含量下降，F(xiàn)SH、LH 含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；與模型組比較，益真低劑量組、益真中劑量組、益真高劑量組、西藥組 E2 含量上升，F(xiàn)SH、LH 含量下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。  結(jié)論  補(bǔ)腎填精中藥仙子益真膠囊可以提高 POF 模型小鼠血清 E2 的含量，降低 FSH、LH 的含量，改善 POF 小鼠sheng殖內(nèi)分泌環(huán)境。

〔關(guān)鍵詞〕 卵巢早衰；仙子益真膠囊；中醫(yī)藥療法；性激素

〔中圖分類號(hào)〕R285.5；R711.75 〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A 〔文章編號(hào)〕doi:10.3969/j.issn.1674－070X.2018.08.006

Effect of Xianzi Yizhen Capsule on Peripheral Serum Sex Hormones in Mice with Premature  Ovarian  Failure

HUANG  Jinyan,  LIN  Xiajing,  XU Min*

(Department of Gynecology, The Second Affiliated Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou, Guangdong 510120, China)

〔 Abstract 〕 Objective To investigate the regulatory effect of Xianzi Yizhen Capsule, a Chinese patent drug for nourishing kidney-essence, on sex hormones in mice with premature ovarian failure (POF) and the possible mechanism of Xianzi Yizhen Capsule in the treatment of POF. Methods The specific pathogen-free female C57BL/6J mice with a regular estrous cycle were

randomly divided into blank control group and model group. The mice in the model group were treated with Tripterygium wilfordii polyglycoside tablets to establish a mouse model of POF and were then randomly divided into model group, low-, middle -,     and high-dose Yizhen groups, and Western medicine group, and corresponding treatment was given. After the treatment ended, ELISA was used to measure the serum level of estradiol (E2), follicle-stimulating hormone (FSH), and luteinizing hormone (LH). Results Compared with the blank control group, the model group had a significant reduction in E2 and significant increases in FSH and  LH  (P  <0.01).  Compared  with  the  model  group,  the  low - ,  middle - ,   and   high -dose   Yizhen   groups   and   the Western medicine group had a significant increase in E2 and significant reductions in FSH and LH (P<0.01). Conclusion  In mice  with POF, the kidney essence-nourishing traditional Chinese medicine Xianzi Yizhen Capsule can improve the serum level of E2, reduce the serum levels of FSH and LH, and improve reproductive endocrine environment.

〔 Keywords 〕 premature ovarian failure; Xianzi Yizhen Capsule; traditional Chinese medicine treatment; sex hormone

〔收稿日期〕2017-10-29

〔基金項(xiàng)目〕國(guó)家中醫(yī)藥管理局課題（1199ws02）；廣東省中醫(yī)藥局科研課題（20152133）。

〔作者簡(jiǎn)介〕黃晉琰，女，主治中醫(yī)師，研究方向：中醫(yī)婦科sheng殖內(nèi)分泌及炎癥疾病。

〔通訊作者〕* 徐     珉，女，博士研究生導(dǎo)師，

卵巢早衰(premature ovarian failure，POF) 是指女性 40 歲以前發(fā)生的排卵和卵巢分泌激素功能的紊亂和停止，出現(xiàn)卵泡刺激素（follicle-stimulating  hor- mone，F(xiàn)SH）和黃體素（luteinizing hormone，LH）升高，而雌二醇（estradiol，E2）降低，臨床主要表現(xiàn)為繼發(fā)性閉經(jīng)、絕經(jīng)、不孕，可能伴有圍絕經(jīng)期癥狀，如潮熱、出汗、煩躁以及骨質(zhì)疏松等。 本病的發(fā)病率呈逐年上升且有低齡化趨勢(shì)[1]。 據(jù)統(tǒng)計(jì)，本病在 40 歲之前的發(fā)病率為 1%～2%， 在 30 歲之前的發(fā)病率為0.1%[2]，在 20 歲以前發(fā)病率為 0.01%[3]。 對(duì)于卵巢早衰， 古代醫(yī)學(xué)無(wú)此病名， 根據(jù)臨床癥狀屬“ yue經(jīng)過少”“血枯”“血隔”“閉經(jīng)”“月水先閉”“經(jīng)水早斷”等 范疇。 古今醫(yī)家對(duì) POF 病yin病機(jī)的認(rèn)識(shí)并不統(tǒng)一， 但大抵認(rèn)為腎虛為該病的關(guān)鍵， 且與心、肝、脾有關(guān)，故各醫(yī)家對(duì) POF 的治療多從補(bǔ)腎著手[4-5]。

補(bǔ)腎填精中藥制劑仙子益真膠囊為廣東省名中醫(yī)李麗蕓教授經(jīng)驗(yàn)方， 由熟地黃、女貞子、旱蓮草、川斷、菟絲子、yin羊藿組成，有滋腎養(yǎng)陰、益精養(yǎng)血之功，在治療yue經(jīng)失調(diào)、不yun不育等疾病中有較好的臨床療效。 既往研究顯示，補(bǔ)腎中藥周期療法可促進(jìn)腎中陰陽(yáng)平衡及其協(xié)調(diào)轉(zhuǎn)化,  達(dá)到健全黃體功能以助孕的目的[6]；給予補(bǔ)腎填精中藥益真膠囊治療后，通過觀察圍排卵期經(jīng)yin道多普勒超聲下卵子大小、形態(tài)及卵巢間質(zhì)血流的變化，提示可改善高齡不孕婦女圍排卵期卵巢間質(zhì)血流，加快卵泡生長(zhǎng)，減少小卵泡排卵，具有改善卵子質(zhì)量、提高卵巢儲(chǔ)備的作用[7]。

為了進(jìn)一步闡述補(bǔ)腎填精中藥仙子益真膠囊治療卵巢早衰的作用，本實(shí)驗(yàn)通過雷公藤多苷片建立卵巢早衰小鼠模型，觀察仙子益真膠囊對(duì)小鼠外周血清性激素水平的影響，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

材料

動(dòng)物 健康雌性 C57BL/6J 小鼠 42 只， 體質(zhì)量（21.24±0.93） g， 由廣東省中醫(yī)院科研動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào) SCXK（京）2016-0011，動(dòng)物合格證號(hào)為 11400700203531。 所有小鼠均經(jīng)yin道脫落細(xì)胞涂片篩查動(dòng)情周期正常。清潔環(huán)境飼養(yǎng)，恒溫（24 ℃）、恒濕（60%）、自然晝夜節(jié)律光照，給予足夠的水和食

物，通風(fēng)良好。

藥物與試劑    所有實(shí)驗(yàn)藥物均購(gòu)自廣東省中醫(yī)院藥房。 雷公藤多苷片，遠(yuǎn)大醫(yī)藥黃石飛云制藥有限公司出品，規(guī)格為 10 mg/片（批號(hào) 20161001）。仙子益真膠囊為廣東省中醫(yī)院院內(nèi)制劑 （ 批號(hào)160904），其主要成分為熟地黃、女貞子、旱蓮草、川斷等。 由院內(nèi)制劑室按上述藥物組成分別選料，經(jīng)過清潔、干燥、粉碎、消毒、浸泡、提取、制粒，粉碎裝膠囊，每粒重 0.5 g，約含生藥量 1.65 g。 補(bǔ)佳樂（戊酸雌二醇片），由拜耳醫(yī)藥保健有限公司出品，1 mg/ 片（批號(hào) 2016278A）。

小鼠血清分析試劑為上海滬鼎生物科技有限公司的 Mouse  E2   ELISA  Kit  （貨號(hào) E-20380），Mouse FSH  ELISA  Kit（貨號(hào) E-20418），Mouse  LH  ELISA Kit（貨號(hào) E-20638）。

主要儀器 酶標(biāo)儀（型號(hào)為 Multiskan FC，美國(guó) Thermo Fisher Scientific 公司），微孔板恒溫振蕩器（型號(hào)為 MB100-4P，杭州匯爾儀器）。
方法

造模 選擇性周期正常的健康雌性 C57BL/ 6J 小鼠 42 只隨機(jī)分為 2 組，空白對(duì)照組 7 只，造模組 35 只。 空白對(duì)照組予等容量生理鹽水灌胃。 造模組參照文獻(xiàn) [8-9] 造模方法， 用雷公藤多苷片 50 mg/

（kg·d），連續(xù)灌胃 14  d 造模。模型建立開始，每天通過觀察小鼠yin道脫落細(xì)胞涂片，了解小鼠動(dòng)情周期變化，當(dāng)出現(xiàn)動(dòng)情周期延長(zhǎng)，yin道角化上皮細(xì)胞減少，有核上皮細(xì)胞混雜，表示建立模型成功。

分組及干預(yù)   造模成功后，將模型小鼠分為模型組及治療組。 其中治療組包括益真低、中、高劑量組和西藥組。 益真低劑量組： 仙子益真膠囊

0.75  g/（kg·d），益真中劑量組：仙子益真膠囊 1.5  g/

（kg·d）。 益真高劑量組：仙子益真膠囊 3  g/（kg·d），西藥組：補(bǔ)佳樂 0.15  mg/（kg·d），模型組及空白對(duì)照組等容量生理鹽水灌胃。 每天 1 次，連續(xù) 21 d。

檢測(cè)指標(biāo) 末次給藥結(jié)束后，各組小鼠禁食24 h， 不禁水，取血 3 mL，將所取血靜置 30 min，2 000 r/min， 離心 10 min，取血清，ELISA 法測(cè)定血清 E2、FSH、LH 的含量，具體操作嚴(yán)格按藥盒說明進(jìn)行。
統(tǒng)計(jì)學(xué)分析     數(shù)據(jù)采用 SPSS  20．0 統(tǒng)計(jì)分析軟件處理，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以“x±s”表示，所有資料進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布者，多組計(jì)量資料采

用單因素方差分析，方差齊者，對(duì)兩個(gè)變量之間計(jì)量資料的比較行 t 檢驗(yàn)，以 P＜0.01 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

與空白對(duì)照組比較， 模型組 E2 含量下降， FSH、LH 含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)， 從激素水平提示造模成功。 與模型組比較，益真低劑量組、益真中劑量組、益真高劑量組、西藥組 E2 含量上升，F(xiàn)SH、LH 含量下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。 可見通過補(bǔ)腎填精中藥治療，改善了 POF 小鼠的性激素分泌水平。 見表 1。

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