ElISA試劑盒實(shí)驗(yàn)是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。在ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作前，許多實(shí)驗(yàn)者會收集相關(guān)實(shí)驗(yàn)資料，真正用到的少之又少！上海滬鼎為您整理了以下內(nèi)容，讓您不再為ELISA實(shí)驗(yàn)煩惱，輕松完成ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)！

一、加樣的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)

    加樣或加試劑時，請注意在吸取標(biāo)本/標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時，*個孔與zui 后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時間控制 在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。 

二、孵育的三條必知

    1.為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo) 板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；

    2.洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài)；

    3.同時應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時間和溫度。

三、ELISA洗滌小技巧

    洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直 接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響zui后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。 

四、反應(yīng)時間的控制

    加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化（比如，每隔 10分鐘），如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。 

五、操作說明 

    1.封板膜只做一次性使用。 

    2.標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高時先將樣本稀釋一定倍數(shù)后再測定，計(jì)算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)。

    3.各步加樣均使用加樣器，并經(jīng)常校對其正確性，一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)（標(biāo)本數(shù)目多的時候，上海恒遠(yuǎn)推薦使用排槍加樣）。

    4.液體標(biāo)本置4℃保存應(yīng)小于1周，-20℃或-80℃均應(yīng)密封保存，-20℃不應(yīng)超過1個月，-80℃不應(yīng)超過2個月；標(biāo)本溶血會影響zui后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測。

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