ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技能之后發(fā)展起來的一種免疫酶技能。此項技能自70年代初面世以來,發(fā)展十分迅速,現(xiàn)在已被廣泛用于生物學和醫(yī)學科學的許多領(lǐng)域。
ELISA試劑盒ELISA原理——ELISA是以免疫學反應為根底,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技能。因為抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行,每參加一種試劑孵育后,可通過洗刷除去多余的游離反應物,然后確保試驗成果的特異性與安穩(wěn)性。在實踐運用中,通過不同的規(guī)劃,詳細的辦法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法,用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。
ELISA試劑盒檢測前準備作業(yè)
1. 請?zhí)嵩?0分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。
2. 將濃縮洗刷液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗刷液可能有結(jié)晶,屬于正?,F(xiàn)象,可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶*溶解后再洗刷液。(加熱溫度不要超越50℃)運用時洗刷液應為室溫。
3. 規(guī)范品: 參加規(guī)范品&標本稀釋液1.0ml至凍干規(guī)范品中,靜置10分鐘,待其充沛溶解后,悄悄混勻(濃度為5000 pg/ml)。然后根據(jù)需要進行倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋)。主張成以下濃度: 2500、1250、625、312.5、156.2、78.1、39.05、0 pg/ml。樣品稀釋液直接作為空白孔 0 pg/ml。如2500pg/ml規(guī)范品:取0.5ml (不要少于0.5ml )5000pg/ml的上述規(guī)范品參加含有0.5ml樣品稀釋液的EP管中,混勻即可,其他濃度以此類推。
4. 生物素化抗體作業(yè)液:試驗前核算當次試驗所需用量(以100μl/孔計),實踐時應多100-200μl。運用前15分鐘,以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體(1:100)成作業(yè)濃度。當日運用。
5. 酶結(jié)合物作業(yè)液:試驗前核算當次試驗所需用量(以100μl/孔計),實踐時應多 100-200μl。運用前15分鐘,以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體(1:100)成作業(yè)濃度。當日運用。
ELISA試劑盒試劑特色——Elisa試驗敏感性高,特異性強,重復性好,ELISA試劑安穩(wěn)、易保存,操作簡潔,成果判別較客觀等因素。
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