漫漫人生路，誰都難免會遭遇各種失落或厄運。在凄風苦雨慘霧愁云的檢測面前，一個強者，是不會向命運垂頭的。風再冷，不會永遠不息；霧再濃，不會經(jīng)久不散。風息霧散，仍是陽光燦爛。接下來給大家講講細胞凍存與復蘇 。

    細胞凍存

    1.試驗前預備：細胞室及工作臺紫外線照耀15min；培育液、PBS、胰酶、小牛血清、DMSO、恒溫水浴箱37℃預熱備用；搜集對數(shù)生長期細胞，在凍存前一天換液

    2.用吸管吸出培育瓶中的細胞培育液，PBS清洗2遍吸出沖洗液，參加適量胰蛋白酶消化。

    3.當令去掉胰蛋白酶，參加少數(shù)新培育液。吸管汲取培育液吹打瓶壁上的細胞，使其成為均勻渙散的細胞懸液。

    4.用吸管將培育液參加凍存管中，離心(1000r/min，10分鐘)。

    5.去上清液，參加與細胞懸液等量的凍存液，用吸管悄悄吹打使細胞均勻

    6.冷存管置于4℃10分鐘----20℃30分鐘----80℃16～18小時(或隔夜)---液氮槽vaporphase長期貯存。-20℃不可超越1h，以避免胞內(nèi)冰晶過大，造成細胞很多損壞，亦可跳過此過程直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微下降一些。

    7.記載每一個冷凍管的位置以保證在今后應用時可以找到每一個冷凍管。

    細胞復蘇

    1.室內(nèi)紫外消毒；培育基、PBS于37℃恒溫水浴預熱備用。

    2.自液氮罐中取出冷凍管，立即放入37℃水槽中快速凍結(jié)，離心。
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    3.去上清，參加培育基，吹打，然后移入培育瓶中，用培育基清洗凍存管，清洗液也移入培育瓶中。

    4.于培育瓶中參加適量培育基，放入CO2培育箱中培育

    5.記載復蘇日期；次日換液。

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