【名稱】：Hcy,兔同型半胱氨酸ELISA試劑盒技術(shù)指導

【規(guī)格】：48T/96T

【方法】：酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA)

【性狀】： 液態(tài)

【Elisa試劑盒種屬】馬鈴薯、鹿、羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。

【標本】血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等

【用途】：科研 實驗

【貯存】： 貯存于2℃-8℃.如有需要，我們將竭城為顧客提供售前，售中，售后的*服務!

需要但未提供的材料 

1. 可在450nm處進行讀數(shù)的酶標儀； 

2. 能精確吸取10-200µL的移液器； 

3. 可調(diào)多道（8）移液器（50－200µL）； 

4. 供可調(diào)多道移液器使用的試劑存放槽； 

5. 洗瓶或洗板機； 

6. 蒸餾水或去離子水； 

7. 1升的圓柱形量筒； 

8. 移液器：1和（10或25 mL）； 

9. 移液器槍頭； 

10. 紙巾； 

11. 計時器，用以監(jiān)控溫育步驟； 

12. 處理池和消毒劑（例如：0.5% 次氯酸鈉, 10% 家用漂白水）；  

注意事項

1. 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達到室

溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。 

2. 洗板不正確可以導致不準確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中

不要讓微孔干燥掉。 

3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。 

4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。 

6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。 

7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。 

8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。 9. 不能使用過期產(chǎn)品。 

10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。  

保存： 貯藏于2-8°C。 

標本收集 

1. 本試劑盒可使用血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、組織液標本。 

2. 室溫（20－25℃）下保存標本不要超過8小時。2－10℃保存標本，不超過48小時。如

耽擱的時間更長，請在-20℃或更低的溫度下保存標本。標本避免多次凍融，這樣可能會損失蛋白活性，產(chǎn)生錯誤結(jié)果。 

準備工作

1. 濃縮洗滌液(20X)用雙蒸水稀釋成1X(至 500ml)。  

操作步驟 

試劑盒應平衡至室溫（20-25°C ）再試驗。     取出所需反應板。 

1. 加入10ul標準品(Standards)、10ul標本于相應反應板孔中。 

2. 每孔加入40ul Anti mouse IL-1 Biotin 和40ul Anti mouse IL-1 POD。輕輕混勻30秒，封

住板孔，室溫溫育 45分鐘。 

3. 洗板：甩盡板內(nèi)液體，用洗滌液洗滌反應板（每孔內(nèi)加入350ul洗滌液），并去除水滴

（在厚疊吸水紙上拍干）；反復洗滌5次。 

4. 每孔加入100ul顯色液， 輕輕混勻10秒，室溫溫育20分鐘。 

5. 每孔加入100ul終止液（Stop Solution）。輕輕混勻30秒；30分鐘內(nèi)在450nm處讀OD

值。  

以O(shè)D值為縱坐標，以標準品濃度為橫坐標，繪制標準曲線。根據(jù)樣品的OD值可在標準曲線上查出其濃度。

制洗液備用。

三．樣品收集、處理及保存

1）.細胞培養(yǎng)上清：

適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液，以1000×g離心15分鐘，收集上清。

2）細胞：

用PBS反復洗滌細胞3次，調(diào)整細胞濃度達到104-106/ml 左右，通過反復凍融，使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份，或者細胞超聲粉碎，離心取上清液檢測。

3）血清：

在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測。

4）血漿：

應根據(jù)標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分鐘后，以1000×g離心15分鐘，收集上清。

5）體液：

包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘，收集上清。

6.）組織標本：

切取組織標本，稱取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標本勻漿，以2000-3000 rmp離心20 分鐘，收集上清進行檢測。

樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

7）保存：

如果樣品不能立即檢測，應將其分裝，-70 ℃保存，避免反復冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

四．操作步驟

1）取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置30分鐘。

2）分組：取出96孔板，根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標準品組（6個濃度）、空白孔、待測樣品組。

3）標準品的稀釋：準備小試管6 只，依次編好號碼，先在各小試管中加入標準品稀釋液100ul，然后取原濃度標準品100ul加入一只已編好號的試管中，充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第三只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第四只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第五只試管中，充分混勻；然后在該試管中取100ul，棄掉。第六只試管作為0 號標準品。

注：為減少實驗誤差，保證準確性，建議設(shè)置復孔。

4）加樣：依照標準品的順序分別加入50ul的標準品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入50ul的蒸餾水；其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標記的抗體10ul。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

5）溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

6）洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒棄去，如此重復5 次，拍干。

7）加酶標溶液：標準品組、待測樣本組各孔中加入50ul的酶標溶液（空白對照孔除外）。

8）溫育：酶標板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時。

9）洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15-30s，充分清洗酶標板5次，用吸水紙*拍干。

10）顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后，再加入顯色劑B液50ul。

11）終止：25-37℃下避光反應10-15分鐘，加入50ul終止液。

12）讀板：在450nm波長讀取各孔的OD值。

注：讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，讀板時間控制在終止反應后的30分鐘內(nèi)，以免影響準確性。

五．數(shù)據(jù)計算

以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，即為樣品的實際濃度。

六．注意事項

1）實驗操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。

2）加樣：加樣時，要控制加樣速度，避免*孔與zui后一孔間的時間間隔過大，否則將會導致不同的預孵育時間，從而影響實驗的準確性以及重復性。

3）孵育：嚴格按照說明書上規(guī)定的孵育時間和溫度進行。

反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化，如果顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應。

4）建議實驗前預測樣品含量，如樣品濃度過高，應對樣品進行稀釋，計算結(jié)果時乘以相應的稀釋倍數(shù)。

5）建議使用本試劑盒時先做預實驗（即先做標準曲線，試用幾個標本），如果對本試劑盒有任何疑問，可和所購經(jīng)銷商，如果因運輸過程導致試劑盒失效，可要求調(diào)換，但概不承擔產(chǎn)品本身以外的任何損失。

七．保存條件及有效期

1.試劑盒保存：2-8℃

2.有效期：6個月

八．訂貨說明

1）賣方確保所訂產(chǎn)品與目錄技術(shù)指標保持*；

2）為了確保買方產(chǎn)品在運輸中的質(zhì)量，對有特殊要求的低溫產(chǎn)品予以濕冰運輸。

3）收到貨物后如出現(xiàn)質(zhì)量問題，買方需在收到貨物一個月內(nèi)向賣方提出書面異議。買方逾期不提出異議，視為貨物符合其要求，賣方不付任何責任。

4）出現(xiàn)質(zhì)量以外的問題，如破損等，買方應在收貨后一個周內(nèi)提出。買方未按時提出異議，視為該產(chǎn)品合格。

本公司對所有售出的產(chǎn)品保證質(zhì)量，并提供良好的售后服務，有關(guān)產(chǎn)品質(zhì)量的投訴，請在收到貨物的32天內(nèi)以書面形式提出，并向我公司技術(shù)人員提供相應的材料，我們會及時派人解決。所有形式的賠償或退換于產(chǎn)品本身，不涉及其他間接內(nèi)容。凡購買本公司任意款elisa試劑盒，均可享受免費代測服務，并提供技術(shù)指導。