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小鼠丙酮酸激酶M2型同工酶elisa試劑盒實驗原理：

本試劑盒采用雙位點夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），測定樣品中大鼠*腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）的水平。向預(yù)先包被大鼠*腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）抗體的酶標(biāo)孔中加入標(biāo)準品、待測樣本和HRP標(biāo)記的大鼠*腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）抗體，經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的組分，然后再加入底物A、B，產(chǎn)生藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中大鼠*腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）的濃度呈正相關(guān)。

ELISA操作常見問題：

1．邊緣效應(yīng) 使用96孔板的ELISA測定中，常發(fā)現(xiàn)有“邊緣效應(yīng)"，即外周孔顯色較中心孔深。經(jīng)研究證實在溫育中的熱力學(xué)梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導(dǎo)體，在實驗室的常規(guī)ELISA測定中，將板從室溫（通常在25℃左右）置于37℃溫箱，板也升溫時，在外周孔與中心孔之間可能存在一熱力學(xué)梯度。因此使用水浴或在將反應(yīng)溶液加入至板孔中時，將板和溶液均加熱至溫育溫度（如37℃），就可以很容易地排除“邊緣效應(yīng)"，并且可提高測定的重復(fù)性。

2．加樣 在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中，必然有使用微量加樣器加入樣本的步驟。注意的關(guān)鍵點是：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快，無法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。所以，有時候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。

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