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技術(shù)文章

ELISA試劑盒實驗中波長與比色的關(guān)系

閱讀:303發(fā)布時間:2016-12-26

ELISA試劑盒一般的表明辦法是將吸收波長寫于A字母的右下角,如OPD 的吸收波長為492nm,表明辦法為"A492nm"或"OD492nm" 。
因而,雙波長比色測定具有能排除由微滴板自身、板孔內(nèi)標(biāo)本的非特異吸收、指紋、刮痕、塵埃等對特異顯色測定吸光度的影響的利益。
比色成果的表達(dá)以往通用光密度(oplical density,OD),現(xiàn)按劃定用吸光度(absorbence,A),兩者意義一樣。
所謂的單波長比色等于一般的以對顯色具有吸收的波長如450nm或492nm進(jìn)行比色測定;
以軟板為載體的實驗,需先將板置于標(biāo)準(zhǔn)96孔的座架中,才可進(jìn)行比色。
ELISA試劑盒比色時應(yīng)先以蒸餾水校零點,測讀底物孔(未經(jīng)任何反響僅加底物液的孔)和空缺孔(以鹽水或稀釋液代替標(biāo)本作全過程的孔),以記實本次實驗的狀況。
在加底物液顯色前,先將軟板邊緣剪凈,這么,此板就可*平妥坐入座架中。
而雙波長雙色則酶標(biāo)儀在靈敏波長如450nm和非靈敏波長630nm下各測定一次,靈敏波上下的吸光度測定值為樣本測定酶反響特異顯色的吸光度與板孔上指紋、刮痕、塵埃等臟物所造成的的吸光度之和;
非靈敏波長下測定即改動波長至必定值,使得樣本測定酶反響特異顯色的吸光度值為零,此時測得的吸光度即為臟物的吸光度值。
ELISA試劑盒以TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有使用,而前者比色波長為450nm,后者為492nm,濾光片需依據(jù)要求隨時替換。
ELISA試劑盒實驗中單個空缺孔的非特異吸收上有必定程度的不確定性,也就是說每次測定或同次測定空缺孔方位的不一樣均有也許得到不一樣吸光度測定值,所以在ELISA測定比色時,是使用雙波長比色。


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