操作說明：

1. 將H9全培養(yǎng)基取出并平衡至室溫，取出包被過Matrix的培養(yǎng)皿/瓶，吸去包被液并加入適量全培養(yǎng)基，置于5% CO2的37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中。

2. 吸走待傳代細胞培養(yǎng)皿/瓶中的iPS全培養(yǎng)基，并且加入無鈣鎂的PBS溶液洗一次。

3. 加入0.5mM EDTA傳代工作液使之全覆蓋皿/瓶底。

4. 室溫放置5 ~ 8 min或37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中孵育3 ~ 5 min，顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開始脫離皿/瓶底，克隆內(nèi)部大部分細胞間出現(xiàn)間隙但尚未相互分離，肉眼觀察到細胞集落變得不透明且發(fā)白，表明細胞消化時間理想。

5. 吸去傳代工作液，即刻加入新鮮的H9全培養(yǎng)基，用移液器扇形吹打培養(yǎng)皿/瓶底，使皿/瓶底貼附的干細胞集落脫落，輕柔緩慢吹吸混勻。

 注：吹吸的力度要輕柔，吹打脫落和吹吸混勻的次數(shù)總共不超過10次為宜。吹打過度導(dǎo)致大量單細胞出現(xiàn)是造成細胞分化或死亡的重要原因。

  注：如有少量細胞無法從皿底脫落，屬于正?，F(xiàn)象。如有大量細胞無法從皿底脫落，需延長消化時間。

6. 顯微鏡下觀察細胞呈4 ~ 20個細胞大小的團塊，水平十字搖勻。

7. 將細胞置于5% CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

8. 每天換液直至達到可以傳代的標準。

注意事項：

培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì)，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。