基本信息：
資源名稱  壞死梭桿菌壞死亞種說明書
種屬：Fusobacteriumnecrophorumsubsp.necrophorum  

安全等級(jí) 1

模式菌株 yes

應(yīng)用領(lǐng)域 模式菌株

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基 35、122.厭氧

生長(zhǎng)條件 37℃
低溫存法：
①壞死梭桿菌壞死亞種說明書簡(jiǎn)單保存法，將瓊脂斜面孢子培養(yǎng)物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養(yǎng)物置于4℃冰箱保存,保存時(shí)間不超過1～2個(gè)月，若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時(shí)間可達(dá)3～4個(gè)月；②液氮超低溫保存法，將生長(zhǎng)穩(wěn)定期的細(xì)胞懸浮在10%甘油或其他低冰點(diǎn)液體中，密封于安瓿管內(nèi)，然后控制冷卻速度，使安瓿管溫度逐步下降至 -35℃時(shí)，即可置于-150～-196℃的液氮罐中保存。大多數(shù)微生物如病毒、噬菌體、多種細(xì)菌、放線菌、酵母和原蟲、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物，都可用此法長(zhǎng)期保存。
注意事項(xiàng)：
1、壞死梭桿菌壞死亞種說明書忌與殺菌的化學(xué)農(nóng)藥一并使用，使用過的殺菌劑或者噴霧器需要*清洗后才能使用。
2、包裝開啟后請(qǐng)一次性用完，未用完應(yīng)密封，并放置于陰涼、干燥的環(huán)境里保存。
3、貯存方法：在密封、陰涼、干燥之處保存
脫水存法：
①壞死梭桿菌壞死亞種說明書沙土保存法，能產(chǎn)孢子的細(xì)菌、放線菌及霉菌可采用此法保存,即將沙和土以3:2比例混合，經(jīng)稀酸處理洗凈過篩,裝入小試管內(nèi),裝置高度為1cm;滅菌2～3次，烘干后即可將在斜面培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好的孢子，用無菌蒸餾水2～2.5ml制成孢子懸液，吸取少許加入沙土管中，經(jīng)真空抽干，外觀呈松散狀態(tài),于4℃冰箱保存，保存期可達(dá)5～7年。
② 冷凍干燥法,將孢子懸浮液與保護(hù)劑（一般用脫脂牛奶或血清）相混合，放在安瓿管內(nèi)于-20～-30℃的乙醇浴中速凍。然后，在低溫下用真空泵抽干，并用五氧化二磷或干冰使水汽結(jié)凍，熔封安瓿管，于低溫下保存。保存期可達(dá)5～10年之久。
③ 石蠟油封存法，在斜面菌種培養(yǎng)物上,倒上滅菌后的石蠟油，高出斜面1cm，于4℃冰箱或低溫干燥處保存，此法不適用于能利用石蠟油作碳源的微生物，保存期為一年以上。
微生物菌種的培養(yǎng)：
⒈壞死梭桿菌壞死亞種說明書孢子制備
⑴ 放線菌孢子的制備
一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，不利于放線菌孢子的形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營(yíng)養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。放線菌斜面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為5～14天。
⑵ 霉菌孢子的制備
霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營(yíng)養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為4～14天。
⒉ 種子制備
⑴ 搖瓶種子制備
搖瓶種子進(jìn)罐，常采用母瓶、子瓶?jī)杉?jí)培養(yǎng)，有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長(zhǎng)。原則上各種營(yíng)養(yǎng)成分不宜過濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。
⑵ 種子罐種子制備
種子罐種子制備的工藝過程，因菌種不同而異，一般可分為一級(jí)種子、二級(jí)種子和三級(jí)種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中，經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲，這樣的種子稱為一級(jí)種子，把一級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為二級(jí)發(fā)酵。如果將一級(jí)種子接入體積較大的種子罐內(nèi)，經(jīng)過培養(yǎng)形成更多的菌絲，這樣制備的種子稱為二級(jí)種子，將二級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為三級(jí)發(fā)酵。同樣道理，使用三級(jí)種子的發(fā)酵，稱為四級(jí)發(fā)酵。
α- 酮戊二酸鈉Novobiocin Sodium Solution2 ug

激動(dòng)素NP40 Lysis Buffer2 ug

L- 乳酸脫酶 ( 兔肌 )NP-40 Lysis Buffer 2 ug

α- 乳糖NP40 Lysis Buffer with Glycerol,2X2 ug

乳果糖NP40 Lysis Buffer,2X2 ug

昆布多糖NP40 Lysis Buffer，High Salt2 ug

卵磷脂 ( 大豆 )NP40 Lysis Buffer，Low Salt2 ug

卵磷脂 ( 蛋黃 )NP40 Permeating Solution in PBS,10X2 ug

L- 亮氨酸NP40 Permeating Solution in TBS,10X2 ug

亮抑酶肽NR83832 ug

亮綠 SF( 淡黃 )NRK2 ug

脂肪酶NRK-52E2 ug

化鋰 ( 無水 )NTERA-22 ug

L-(+) 乳酸鋰鹽NTP Solution，10 mM2 ug

L- 賴氨酸鹽酸鹽Nuclease ,Micrococcal 2 ug
*　NIH硫乙醇酸鹽肉湯　無菌實(shí)驗(yàn)的真菌和需氧菌培養(yǎng)500g

*　液體A（0.1%蛋白胨水）　在USP中可用作FTM的替代品300mL*10

*　Fluid A　

*　液體D（0.1%蛋白胨水和吐溫80）　無菌實(shí)驗(yàn)中用作沖洗/稀釋液300mL*10

*　Fluid D　

*　胰蛋白大豆肉湯　無菌實(shí)驗(yàn)中用作沖洗/稀釋液（樣品含油和卵磷脂）100mL*25
壞死梭桿菌壞死亞種說明書Anaerobic agar acc.to BREWER 厭氧性瓊脂    1.05452.0500MERCK默克

查普曼瓊脂/葡萄狀球菌選擇瓊脂    

ITC broth ( base) irgasan-ticarcillin-potassium chlorate broth    1.16723.0500MERCK默克

MSRV medium( base) modified MSRV改性培養(yǎng)基（基礎(chǔ)）    1.09878.0500MERCK默克

SPS agar ANGELOTTI perfringens selective agar SPS瓊脂/ANGELOTTI    1.10235.0500MERCK默克

Fraser肉湯基礎(chǔ)    與Fraser肉湯添加物合用選擇增強(qiáng)與鑒定李斯特菌500g

Tryptic Soy Agar (Soybean-Casein Digest Agar Medium)