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elisa分析檢測試劑盒實驗操作中如此重要

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elisa分析檢測試劑盒實驗操作中如此重要
1. 間接法測抗體
間接法是檢測抗體常用的方法。其原理為利用酶標記的抗抗體(二抗)以檢測與固相抗原結(jié)合的
受檢抗體,故稱為間接法。操作步驟如下:
1)將特異性抗原與固相載體聯(lián)結(jié),形成固相抗原,洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。
2)加稀釋的樣本,保溫反應(yīng)。樣本中的特異抗體與固相抗原結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。
經(jīng)洗滌后,固相載體上只留下特異性抗體,樣本中的其他成份在洗滌過程中被洗去。
3)加酶標抗抗體。固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標抗抗體結(jié)合,從而間接地標記上酶。洗滌后
,固相載體上的酶量與樣本中受檢抗體的量正相關(guān)。
4)加底物顯色。
2.競爭法測抗原
小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的位點,因此不能用雙抗體夾心法進行測定
,可以采用競爭法模式。其原理是標本中的抗原和一定量的酶標抗原競爭與固相抗體結(jié)合。標
本中抗原量含量愈多,結(jié)合在固相上的酶標抗原愈少,zui后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物
等ELISA測定多用此法。
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