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細胞類型和暴露于核酸酶的持續(xù)時間的影響

時間:2017-7-18閱讀:139
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elisa分析檢測試劑盒研究人員利用人類和小鼠細胞以及不同的DNA雙鏈斷裂(DSBs)誘導(dǎo)因子和測序平臺對BLESS法進行驗證。BLESS能夠識別端粒末端、SCE核酸內(nèi)切酶誘導(dǎo)的DNA雙鏈斷裂以及復(fù)雜的DSB全基因組。作為一種原理證明,我們讓人類細胞復(fù)制壓以敏感性基因組為特點,確定了> 2,000非均勻分布的阿非迪霉素敏感區(qū)(ASRS),它們中基因過多,富含微衛(wèi)星重復(fù)序列。人類癌癥重排區(qū)也富含ASRS,許多癌癥相關(guān)的基因?qū)?fù)制壓具有*的敏感性。
zui終,研究人員利用SITE-Seq來描繪了一組sgRNP生化切割的圖譜,檢測了靶向人類基因組的sgRNA的Cas9特異性,這些位點的數(shù)目取決于sgRNA序列和核酸酶濃度,在較低濃度下鑒定的位點顯示出細胞中脫靶突變的傾向性較高,脫靶位點列表也指出細胞內(nèi)Cas9活性受到sgRNP遞送,細胞類型和暴露于核酸酶的持續(xù)時間的影響。
研究人員認為,這種方法可以鑒定與細胞類型特異的單核苷酸多態(tài)性相關(guān)的脫靶突變,證明了它有望生成個性化的特異性圖譜。同時CIRCLE-seq為鑒定全基因組范圍的脫靶突變提供了一種快速全面的方法。
研究人員也檢測了新方法的靈敏度。他們獲得了針對HBB基因的向?qū)NA的脫靶結(jié)果,并將這個圖譜與另一種鑒定方法(Digenome-seq)獲得的圖譜進行比較.

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