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當(dāng)前位置:上海邦景實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>信號(hào)系列>> 脫氫酶(DHA)測(cè)試盒可見分光光度法
貨號(hào) | BJ-01611357-2 |
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特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
脫氫酶(DHA)測(cè)試盒可見分光光度法 | 可見分光光度法 | 50管/48樣 | BJ-01611357-2 |
商品介紹:
測(cè)定意義 脫氫酶(dehydrogenase, DHA) 是一類催化物質(zhì)氧化還原反應(yīng)的酶,催化底物通過細(xì)胞色素系統(tǒng)被氧化,釋放的能量供機(jī)體使用,是生物體取得能量的一種方式。 測(cè)定原理 在細(xì)胞呼吸過程中,氫受體2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC)在脫氫酶作用下接受氫以后,被還原為三苯基甲鐟(Triphenyl Formazone, TF),TF呈現(xiàn)紅色,于485nm測(cè)定其吸光值,即得脫氫酶活性。 自備實(shí)驗(yàn)儀器及用品 天平、恒溫培養(yǎng)箱或水浴鍋、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、冰、蒸餾水、甲醇(不允許快遞,請(qǐng)用戶自備)。 |
優(yōu)點(diǎn)如下:
1、快速簡(jiǎn)便:全程約50分鐘,可測(cè)100例左右樣本。
2、取樣量微:本法取手指或耳垂等末梢血20ul~50ul即可測(cè)紅細(xì)胞中的SOD,只需2ml靜脈血可測(cè)白細(xì)胞中的SOD及血小板中SOD,只需50mg左右組織就可測(cè)組織勻漿、胞漿中的SOD,0.2g組織可測(cè)線粒體及微粒體中的SOD。
3、靈敏度高:IC50=0.05g/ml,是鄰苯三酚法的18倍。
4、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放6個(gè)月有效。
5、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.7%。
6、回收試驗(yàn): X =103.3%。
7、受外界影響因素小:干擾因素少,重復(fù)性強(qiáng)。
8、測(cè)試面廣:可測(cè)動(dòng)物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等,效果均佳。
測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)充分混勻,室溫靜置30min后,450nm處測(cè)定各管吸光值A(chǔ)。
注意事項(xiàng):
待測(cè)樣品-70℃可保存1個(gè)月。需注意反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致SOD部分失活。
一個(gè)試劑盒如果不能在3次內(nèi)使用完畢,其中的WST-8需要在使用時(shí)適當(dāng)分裝,以避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的檢測(cè)效果下降。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋時(shí)所用的稀釋液應(yīng)盡量與樣品一致。樣品用試劑盒提供的SOD樣品制備液制備時(shí),標(biāo)準(zhǔn)品也宜使用SOD樣品制備液進(jìn)行稀釋;當(dāng)樣品為血液等無需處理的樣品時(shí),宜使用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。
抗氧化物會(huì)對(duì)本試劑盒的檢測(cè)產(chǎn)生干擾,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都會(huì)使測(cè)定出來的吸光度顯著升高。此時(shí)盡管樣品沒有顏色,如果設(shè)置了使用說明中的空白對(duì)照3,就可以消除樣品中的抗氧化物的干擾。
硫suan乙酰肝su6腦苷脂轉(zhuǎn)硫suan酶1抗體Sphingomonas phyllosphaerae大鼠粒巨噬集落激因子(GM-CSF)Elisa測(cè)定試劑盒
神經(jīng)保護(hù)肽HN抗體球孢白僵菌β樣肽(1-28)IHC WB抗體流式免疫組化
大鼠細(xì)小病H-1株(H-1)抗體(N端)美澳型核果褐腐病菌γ1氨基丁suan受體α1抗體流式免疫組化
透明質(zhì)suan合成酶1抗體麗齒菌屬糖皮質(zhì)激su受體抗體流式免疫組化
缺氧誘導(dǎo)因子3α/HIF-3α抗體美澳型核果褐腐病菌胰島su受體底物-4抗體流式免疫組化
缺氧誘導(dǎo)因子脯氨酰4羥化酶抗體黑曲霉微管相關(guān)蛋白抗體流式免疫組化
透明質(zhì)suan酶2/2抗體溶血性曼氏桿菌有死亡區(qū)的腫瘤壞死因子受體1相關(guān)蛋白抗體流式免疫組化
心臟鈣粘蛋白抗體蘇云金芽孢桿菌蠟螟亞種端粒結(jié)合蛋白1抗體流式免疫組化
17-β-羥脫氫酶6抗體釀酒酵母D-丙氨
H5亞型全病抗體波氏假阿利什菌β-葡萄糖苷suan酶
人類皰疹病8 ORF14抗體果生鏈核盤菌5-溴-4氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷
透明質(zhì)suan酶2/2抗體裂褶菌馬脾鐵蛋白
同源盒蛋白B2抗體香菇(L26)轉(zhuǎn)鐵蛋白
同源盒蛋白B8抗體鏈格孢(可定)19-119kDa預(yù)先染色分子量MARK
熱休克蛋白70家族蛋白6抗體亮白曲霉6-磷suan葡萄糖鋇鹽
脫氫酶(DHA)測(cè)試盒可見分光光度法葡萄糖氧化酶(GOD)試劑盒 Anti-CABP2 Antibody腺苷suan環(huán)化酶激活肽6-38
B活化因子受體(BAFFR)試劑盒 Anti-CABP7 Antibody腺苷suan環(huán)化酶激活肽/血管活性腸肽受體(抗原)
接觸蛋白相關(guān)蛋白樣蛋白4(CNTNAP4)試劑盒Anti-CABP7 Antibody腺苷suan環(huán)化酶激活肽受體(抗原)
微纖絲相關(guān)蛋白4(MFAP4)試劑盒 Anti-CACNA1B Antibody關(guān)節(jié)炎相關(guān)基因
蛋白激酶C-η(PKCη)試劑盒Anti-CACNA2D1 Antibody血小板源性生長(zhǎng)因子-1(抗原)
信號(hào)su3A(SEMA3A)試劑盒Anti-CACNA2D1 Antibody血小板源性生長(zhǎng)因子-B(抗原)
可溶性半乳糖凝集su3結(jié)合蛋白(LGALS3BP)試劑盒Anti-CACNA1I Antibody血小板源性生長(zhǎng)因子受體-A(抗原)
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
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