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當(dāng)前位置:上海邦景實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>糖酵解系列>> 己糖激酶(HK)測(cè)試盒紫外分光光度法
貨號(hào) | BJ-01611159-2 |
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特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
己糖激酶(HK)測(cè)試盒紫外分光光度法 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | BJ-01611159-2 |
商品介紹:
測(cè)定意義HK(EC 2.7.1.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是葡萄糖分解過程中的第一個(gè)關(guān)鍵酶,催化葡萄糖轉(zhuǎn)化為6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途徑的交叉點(diǎn)。測(cè)定原理HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步催化6-磷酸葡萄糖脫氫生成NADPH,NADPH在340nm有特征吸收峰。需自備的儀器和用品紫外分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
優(yōu)點(diǎn)如下:
1、快速簡(jiǎn)便:全程約50分鐘,可測(cè)100例左右樣本。
2、取樣量微:本法取手指或耳垂等末梢血20ul~50ul即可測(cè)紅細(xì)胞中的SOD,只需2ml靜脈血可測(cè)白細(xì)胞中的SOD及血小板中SOD,只需50mg左右組織就可測(cè)組織勻漿、胞漿中的SOD,0.2g組織可測(cè)線粒體及微粒體中的SOD。
3、靈敏度高:IC50=0.05g/ml,是鄰苯三酚法的18倍。
4、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放6個(gè)月有效。
5、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.7%。
6、回收試驗(yàn): X =103.3%。
7、受外界影響因素?。焊蓴_因素少,重復(fù)性強(qiáng)。
8、測(cè)試面廣:可測(cè)動(dòng)物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等,效果均佳。
測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)充分混勻,室溫靜置30min后,450nm處測(cè)定各管吸光值A(chǔ)。
注意事項(xiàng):
待測(cè)樣品-70℃可保存1個(gè)月。需注意反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致SOD部分失活。
一個(gè)試劑盒如果不能在3次內(nèi)使用完畢,其中的WST-8需要在使用時(shí)適當(dāng)分裝,以避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的檢測(cè)效果下降。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋時(shí)所用的稀釋液應(yīng)盡量與樣品一致。樣品用試劑盒提供的SOD樣品制備液制備時(shí),標(biāo)準(zhǔn)品也宜使用SOD樣品制備液進(jìn)行稀釋;當(dāng)樣品為血液等無需處理的樣品時(shí),宜使用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。
抗氧化物會(huì)對(duì)本試劑盒的檢測(cè)產(chǎn)生干擾,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都會(huì)使測(cè)定出來的吸光度顯著升高。此時(shí)盡管樣品沒有顏色,如果設(shè)置了使用說明中的空白對(duì)照3,就可以消除樣品中的抗氧化物的干擾。
蛋白激酶C(多肽抗原)爪哇根霉水通道蛋白3(AQP-3)elisa定量檢測(cè)試劑盒
腎上腺su能受體β1(抗原)白黃側(cè)耳分泌性白蛋白mei抑制因子(SLPI)elisa定量檢測(cè)試劑盒
膜粘連蛋白-5(抗原)灰肉色鏈霉菌大鼠脂肪型脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP4)elisa定量檢測(cè)試劑盒
水通道蛋白-4(抗原)球孢白僵菌大鼠促卵泡激su(FSH)elisa定量檢測(cè)試劑盒
B7-H4(抗原)暗灰鏈霉菌去甲腎上腺su(NA/NE)elisa定量檢測(cè)試劑盒
BADH2抗原唐菖蒲伯克霍爾德氏菌大鼠促黃體生成激su(LH)elisa定量檢測(cè)試劑盒
骨鈣su(抗原)糞產(chǎn)桿菌*可替?。–otinine)elisa定量檢測(cè)試劑盒
鈣激活通道蛋白白蘭鏈霉菌不均一核糖核蛋白A2/B1 (HNRPA2B1)elisa定量檢測(cè)試劑盒
BTG2(抗原)鬼傘屬大鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGE)elisa定量檢測(cè)試劑盒
原癌基因蛋白(活化蛋白1)(抗原)叢毛紅曲霉大鼠上皮型鈣黏蛋白 (E-Cad)elisa定量檢測(cè)試劑盒
周期suD1(抗原)香蕉大鼠嗜酸粒趨化因子(ECF/CCL11)elisa定量檢測(cè)試劑盒
β-酪蛋白(抗原)金耳大鼠熱休克蛋白60(Hsp-60)elisa定量檢測(cè)試劑盒
膽囊收縮su/縮膽囊su(八肽)莫哈韋芽孢桿菌大鼠白介su12 p35(IL-12 p35)elisa定量檢測(cè)試劑盒
CD4(抗原)假單胞菌大鼠白介su1β(IL-1β)elisa定量檢測(cè)試劑盒
CD4抗原黃綠綠僵菌*大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)elisa定量檢測(cè)試劑盒
己糖激酶(HK)測(cè)試盒紫外分光光度法微粒體谷胱S轉(zhuǎn)移酶1(MGST1)試劑盒Anti-MMP14 AntibodyWolfram綜合征蛋白1
基質(zhì)金屬蛋白mei7(MMP-7)試劑盒Anti-MMP16 Antibody磷酸化賴an酸缺陷型蛋白激酶1
蛋白S(PROS)試劑盒Anti-MMP16 AntibodyWNK4
心鈉肽(ANP)試劑盒Anti-MMP2 Antibody包含氧化還原酶的WW域
p53上調(diào)凋亡調(diào)節(jié)因子(PUMA)試劑盒Anti-MMP2 Antibody色an酸豐富蛋白
腫瘤蛋白P53(TP53)試劑盒Anti-MMP20 AntibodyX射線修復(fù)交叉互補(bǔ)蛋白
調(diào)節(jié)正常T表達(dá)和因子(RANTES)試劑盒 Anti-MMP24 AntibodyDNA補(bǔ)充修復(fù)XPC蛋白
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
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