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免疫熒光技術(shù)的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內(nèi),保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產(chǎn)品名稱 | 程序性死亡配體2抗體 |
英文名稱 | B7-DC |
貨號 | BJ-K7358 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產(chǎn)時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。?
抗體的生活習性:
(1)結(jié)合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別,就在于抗體能與相應抗原發(fā)生特異性結(jié)合,在體內(nèi)導致生理或病理效應;在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應??贵w是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補體:抗體與相應抗原結(jié)合后,借助暴露的補體結(jié)合點去激活補體系統(tǒng)、激發(fā)補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結(jié)合不同種的細胞,產(chǎn)生不同的疚,參與免疫應答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質(zhì),也具有刺激機體產(chǎn)生免疫應答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì),均能破壞抗體的作用??贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上??捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經(jīng)透析法將其純化。
STAT5B aibody90 kDaP51692Human
STAT6 aibody100-110 kDaP42226Human, Mouse, Rat
STAT6 aibody100-110 kDaP42226Human, Mouse, Rat
STATH aibody7-10 kDaP02808Human, Mouse
Stathmin aibodyRefer to figuresP16949Human, Mouse
Stathmin aibody18 kDa P16949Human, Mouse
STAU1 aibody58 kDaO95793Human, Mouse, Rat
γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶5輕鏈抗體別 名 Gamma glutamyl transpeptidase rated enzyme; Gamma glutamyltranspeptidase 5; Gamma-glutamyl transpeptidase-rated enzyme; Gamma-glutamyltransferase 5 heavy chain; Gamma-glutamyltransferase-like activity 1; Gamma-glutamyltranspeptidase 5; GGT 5; GGT R; GGT-r; GGT5; GGT5_HUMAN; DKFZP566O011; GGTLA1; Glutathione hydrolase 5; Leukotriene-C4 hydrolase; Gamma-glutamyltransferase 5 light chain.
γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶7輕鏈抗體別 名 Gamma-glutamyltransferase 7 light chain; D20S101; dJ18C9.2; Gamma glutamyltransferase 4; Gamma glutamyltransferase 7; Gamma glutamyltransferase like 3; Gamma glutamyltransferase like 5; Gamma glutamyltranspeptidase 7; Gamma glutamyltranspeptidase like 3; GGT 7; GGT4; GGTL3; GGTL5; GGT7_HUMAN.
溶酶體累積病相關(guān)蛋白/口吃相關(guān)蛋白抗體別 名 N-acetylglucosamine-1-phosphotransferase subunit alpha; EC=2.7.8.17; GlcNAc-1-phosphotransferase subunits alpha/beta; GNPTA; GNPTA_HUMAN; Gnptab; KIAA1208; Stealth protein GNPTAB; UDP-N-acetylglucosamine-1-phosphotransferase subunits alpha/beta.
程序性死亡配體2抗體腸炎沙門氏種屬: Salmonella eeritidis提供形式: 西林瓶,定性片安全等級: 2模式株: no研究;教學;分類。培養(yǎng)基: 營養(yǎng)肉汁瓊脂:蛋白胨 5.0g,牛肉浸取物 3.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾水 1.0L,pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿時加入5mg MnSO4·H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。生長條件: 37℃,好氧。生長特性: 革蘭氏陰性桿,大小為0.6-2.0μm × 1.0-4.0μm,通常以周生鞭毛運動;兼性厭氧,營養(yǎng)要求不高;不能利用檸檬酸鹽作為碳源;產(chǎn)氣,大多數(shù)株不產(chǎn)生H2S,發(fā)酵阿拉伯糖而不發(fā)酵木糖,僅對人致病,能夠引起與傷寒類似的癥狀。-20℃避光保存;運輸條件:冰袋運輸。
Alternaria│tenuissima提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25℃
Trichoderma│sp.分離基物: 植物提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 0014生長條件: 18-26℃液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Erythrobacter│citreus分離基物: 沉積物/土黃色沉積物上覆水提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no1、海洋石油污染生物修復; 2、生物活性物質(zhì)篩選。培養(yǎng)基: 821生長條件: 28℃液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Vibrio│sp.分離基物: 生物樣/赤點石斑魚腸體內(nèi)容物提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no共生微生物/赤點石斑魚腸道共生培養(yǎng)基: 33生長條件: 28℃液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Asaia│sp.分離基物: 野生諾尼果內(nèi)提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: CM0033生長條件: 28℃-80℃冰箱凍結(jié)法
Chromohalobacter│sp.分離基物: 水樣/表層海水提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式株: no微生物/高鹽(鹽度20%-26%)培養(yǎng)基: 471生長條件: 20-25℃液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Xahomonas│campestris pvar. juglandis (Pammel) Dowson分離基物: 枝提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 141生長條件: 30真空冷凍干燥法;定期移植法
Nocardioides│terrigena分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 832生長條件: 18℃真空冷凍干燥法
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