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免疫熒光技術(shù)的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內(nèi),保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產(chǎn)品名稱 | 錨定蛋白B抗體 |
英文名稱 | Ankyrin B |
貨號 | BJ-K7180 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產(chǎn)時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存。抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。?
抗體的生活習性:
(1)結(jié)合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別,就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合,在體內(nèi)導致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)??贵w是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補體:抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后,借助暴露的補體結(jié)合點去激活補體系統(tǒng)、激發(fā)補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結(jié)合不同種的細胞,產(chǎn)生不同的疚,參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質(zhì),也具有刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì),均能破壞抗體的作用??贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上??捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經(jīng)透析法將其純化。
胱天蛋白酶11(P11)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- GIYD2 antibody31 kDa
巨噬細胞炎性蛋白1β(MIP1β)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- GJB3 antibody31 kDa
巨噬細胞炎性蛋白1α(MIP1α)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- GJB6 antibody
巨噬細胞來源趨化因子(MDC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- GJC2 antibody47 kDa
巨噬細胞集落刺激因子(MCSF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- GK3P antibody61kd
單核細胞趨化蛋白3(MCP3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- GK5 antibody59 kDa
單核細胞趨化蛋白3(MCP3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- GKAP1 antibody45-50 kDa
單核細胞趨化蛋白2(MCP2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- GKN1 antibody22 kDa
單核細胞趨化蛋白1(MCP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- GKN2 antibody20 kDa
單核細胞趨化蛋白1(MCP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- GLAST antibody50-55, 90-100 kDa
L選擇素(SELL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- GLDC antibody113 kDa
白血病抑制因子(LIF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- GLI2-Specific antibody88 kDa
瘦素(LEP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- GLI3-Specific antibody230kd
瘦素受體(LEPR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- GLI3-Specific antibody
白介素5(IL5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- GLI4 antibody41kd
白介素3(IL3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- GLIPR1L1 antibody24 kDa
N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- GLIS1 antibody66 kDa
N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- GlnRS antibody88 kDa
白介素1受體Ⅰ(IL1R1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)anti- GLO1 antibody21-25 kDa
錨定蛋白B抗體釀酒酵母Wardomyces pulvinata (Marchal) Dickinson廈門海旋菌
番鴨細小病毒Phytophthora infestans (Montagne) de Bary特羅伊察棲砂桿菌
綠毛殼Pleurocapsa sp.小麥蒼白桿菌
單增李斯特氏菌dried海洋檸檬胞菌
河流桿菌Plasmid Mini Kit I 質(zhì)粒小量提取試劑盒 I 型戈登氏菌
鏈格孢(可訂購)Bovine Transferrin, HOLO牛飽和鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白黃海海桿菌
刺孢小克銀漢霉輪生變種SYBR Green I (10,000× in DMSO) 核酸凝膠染料檸檬色赤桿菌
普氏糞桿菌HieffTM qPCR SYBR® Green Master Mix (Rox Provided Seperay)食紅球菌
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