大鼠16α羥基雌酮1（16-α OHE-1）試劑盒實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠16α羥基雌酮1(16-α OHE-1)水平。用純化的大鼠16α羥基雌酮1(16-α OHE-1)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入16α羥基雌酮1(16-α OHE-1)，再與HRP標(biāo)記的16α羥基雌酮1(16-α OHE-1)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的16α羥基雌酮1(16-α OHE-1)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中大鼠16α羥基雌酮1(16-α OHE-1)濃度。 

試劑盒組成 

1
 30倍濃縮洗滌液
 20ml×1瓶
 7
 終止液
 6ml×1瓶
 
2
 酶標(biāo)試劑
 6ml×1瓶
 8
 標(biāo)準(zhǔn)品（1200 ng/L）
 0.5ml×1瓶
 
3
 酶標(biāo)包被板
 12孔×8條
 9
 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 1.5ml×1瓶
 
4
 樣品稀釋液
 6ml×1瓶
 10
 說(shuō)明書(shū)
 1份
 
5
 顯色劑A液
 6ml×1瓶
 11
 封板膜
 2張  
 
6
 顯色劑B液
 6ml×1/瓶
 12
 密封袋
 1個(gè)
 

標(biāo)本要求 

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

大鼠16α羥基雌酮1（16-α OHE-1）試劑盒操作步驟

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支，用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
600ng/L
 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 
300ng/L
 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
 150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 
150ng/L
 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
 150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 
75ng/L
 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
 150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 
37.5ng/L
 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
 150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 

加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。 
溫育：操作同3。
洗滌：操作同5。
顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行大鼠16α羥基雌酮1（16-α OHE-1）試劑盒。